Интегритет мРНА
Значај анализе интегритета мРНК
мРНК су препознате по својој инхерентној нестабилности и подложне су фрагментацији у присуству спољних фактора, посебно током ин витро транскрипције (ИВТ) и процеса пречишћавања, где свеприсутне нуклеазе представљају изазов. Процена интегритета мРНК је кључна у каснијем развоју лекова заснованих на мРНК, обезбеђујући безбедност и доступност производа.
Иаохаи-БиоПхарма пружа свеобухватне услуге тестирања интегритета мРНК, користећи методе као што су електрофореза у агарозном гелу (АГЕ), капиларна електрофореза (ЦЕГ) и течна хроматографија високих перформанси (ХПЛЦ), придржавајући се ригорозних стандарда квалитета за истраживања и клиничка испитивања.
Регулаторни захтеви за интегритет мРНК
Према регулаторним разматрањима СЗО, „интегритет структуре мРНК се сматра критичним атрибутом квалитета за ослобађање мРНК. Дакле, потребна је контрола интегритета мРНК, процента нетакнуте мРНК, процента фрагмената мРНА и тако даље.
Аналитицал Метход
Анализа | Методе |
интегритет мРНК | AГЕ, Агаросеgел електрофореза |
ЦГЕ,Капиларна електрофореза |
ЦГЕ-ЛИФ, капиларна гел електрофореза са детекцијом флуоресценције изазване светлом |
Интегритет мРНА помоћу електрофорезе агарозног гела
Електрофореза у агарозном гелу је широко коришћена техника за процену интегритета укупне РНК. Ово укључује стављање узорка РНК на денатурирајући агарозни гел, обојен етидијум бромидом или СИБР Греен. Денатурирајући гел, састављен од агарозе, олакшава одвајање РНК на основу величине када се примени електрична струја. Како негативно наелектрисана РНК мигрира ка позитивном крају гела, мањи фрагменти се крећу брже, што резултира сортирањем РНК молекула на основу величине.
Интегритет мРНА помоћу капиларне гел електрофорезе
Капиларна гел електрофореза (ЦГЕ) представља аналитички приступ високе резолуције који је кључан за мерење интегритета РНК молекула по дужини. Ова процена има значај за осигурање квалитета, разумевање потенције и оптимизацију производних процеса. Слично електрофорези у агарозном гелу, ЦГЕ користи електричну струју за одвајање фрагмената РНК на основу њиховог набоја и величине. У ЦГЕ, капилара је испуњена матриксом гела за одвајање натопљеном флуоресцентном бојом. Кретање РНК дуж капиларе зависи од њене величине, а детекција се постиже коришћењем ултраљубичастих (УВ) или светлосних детектора флуоресценције (ЛИФ).
EN
