Припрема ЦирцРНА захтева линеарну РНК као прекурсорски материјал (РНА прекурсор) за циклизацију, где се прекурсор РНК обично припрема коришћењем линеаризоване плазмидне ДНК као шаблона за транскрипцију и транскрибује ин витро уз помоћ Т7 РНК полимеразе.
Висококвалитетна плазмидна ДНК је неопходна за ин витро транскрипцију (ИВТ). Засновано на платформи за припрему зрелог плазмида, Иаохаи Био-Пхарма може да пружи услугу припреме високе чистоће и стандардне линеаризоване плазмидне ДНК (пДНК) како би се осигурао интегритет ИВТ производа.
Proces | Опциона услуга | Детаљи услуге | Период испоруке (радним даном) |
Кружна припрема плазмида | Синтеза гена | Синтеза гена (треће стране) | 7-10 |
Амплификација плазмида | Амплификација плазмида | 2 | |
Екстракција плазмида | |||
Линеаризована припрема плазмида | Линеаризација и пречишћавање плазмида | Линеаризација плазмида | 1 |
Пречишћавање ДНК линеаризације | |||
Контрола квалитета плазмидне ДНК | Чистоћа концентрације | Ултраљубичаста (УВ) спектрофотометрија | 1-2 |
Конформација плазмида | Електрофореза у агарозном гелу (АГЕ) | ||
Капиларна електрофореза (ЦЕ) - опционо | |||
Идентификација плазмида | Идентификација рестрикционог ензима/ АГЕ |
Флексибилан избор метода линеаризације
Оптимизација метода екстракције и пречишћавања ДНК за постизање високих стопа опоравка.
Строги стандарди контроле процеса, са стопом суперхеличне конформације узорака плазмида за истраживање од преко 80%.
Висок стандард и високоефикасна припрема плазмида и услуге контроле квалитета како би се задовољиле експерименталне потребе.
Узимајући Иаохаи Био-Пхарма производ мЦхерри цирцРНА као пример, однос суперсмотаних узорака плазмида шаблона за транскрипцију (истраживачки степен) је више од 70%, са стопом линеаризације од близу 100%.
мЦхерри цирцРНА је припремљена са линеаризованим плазмидом као шаблоном и трансфектована у 293Т ћелије. Висок ниво експресије флуоресценције (црвена флуоресценција) се детектује након 24 сата од трансфекције, који ће бити појачан након 48 сати, а још увек се може детектовати 7. и 14. дан након трансфекције.
мЦхерри протеин се стабилно и ефикасно експримира, а чистоћа транскрипционог шаблона може да задовољи захтеве цирцРНА лека (ДП) са високим квалитетом.
Ин витро валидација експресије мЦхерри цирцРНА