Што се тиче припреме серије РНК прекурсора, најчешће коришћена метода је ин витро транскрипција (ИВТ). ИВТ реакција користи линеаризовану плазмидну ДНК која садржи Т7 промотер као шаблон и синтетише прекурсор РНК са нуклеозид трифосфатима (НТП) као супстратом у присуству Т7 РНК полимеразе.
Методе циклизације ин витро укључују хемијску лигацију, ензимску лигацију и методу пермутираног интрон-егзона (ПИЕ). Хемијска и ензимска лигација су погодне за циклизацију краћих РНК. Када је фрагмент већи од 100 нт, брзина циклизације ће се значајно смањити. Насупрот томе, метода нуклеазе заснована на ПИЕ систему може постићи циклизацију секвенци од 8 кб.
Под катализом гванозин трифосфата (ГТП), ПИЕ структура пролази кроз циклизацију екстра-интронских секвенци. У комбинацији са разумном стратегијом за повећање стопе циклизације, Иаохаи Био-Пхарма може постићи циклизацију до 4 кб секвенце, са ефикасношћу циклизације већом од 80%.
Ин витро реакција циклизације РНК тече на следећи начин:
Прекурсор РНК се синтетише ин витро транскрипцијом, а ПИЕ компонента довршава самоспајање под катализом ГТП да би се формирала цирцРНА.
Детаљи о услугама
| Proces | Детаљи услуге | Период испоруке (радним даном) |
| Ин витро транскрипција и циркулација | Потврда реакционог система | 1-2 |
| Ин витро транскрипција и реакције циклизације |
| Варење РНасе Р |
| Оптимизација реакција | Састав реакције, оптимизација времена | 2-5 |
Наше карактеристике
- Ригорозни дизајн и оптимизација тестова
Може се постићи до 4 кб РНК циклизације.
- Висока ефикасност циклизације
Стопа циклизације већа од 80% може се постићи рационалном стратегијом оптимизације секвенце.
Кроз строгу контролу РНаза у експерименталном окружењу и потрошном материјалу, деградација РНК се ефикасно спречава.
Студија случаја
Ин витро циклизација и обогаћивање цирцРНА
На основу ПИЕ система, Иаохаи Био-Пхарма је оптимизовала секвенцу цирцРНА, са стопом циклизације већом од 80% помоћу електрофорезе у агарозном гелу (АГЕ). Коришћењем РНасе Р за обогаћивање цирцРНА, резултати електрофорезе Е-гела показују да се линеарни РНК прекурсор дигестира, а након даљег пречишћавања, већина урезане цирцРНА може бити уклоњена. Решење за пречишћавање је самостално развила Иаохаи Био-Пхарма.
Ин витро циркулација и обогаћивање цирцРНА
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
