N-glycanenprofilering is essentieel voor de productie van biofarmaceutica. Yaohai Bio-Pharma biedt N-glycaanprofileringsservice met behulp van vloeistofchromatografie-massaspectrometrie (LC-MS) van vrijgegeven en gelabelde glycanen. De algemene stappen voor het bereiden van N-glycanenmonsters omvatten vertering van het glycoproteïne (GP), deglycosylatie, zuivering, labeling/derivatisering en vastefase-extractie (SPE).
We zijn betrokken geweest bij de eiwitstructurele karakterisering van verschillende grote moleculen, waaronder recombinante subeenheidvaccins, nanobodies/VHHs/single-domein antilichamen (sdAbs), antilichaamfragmenten, hormonen/peptiden, cytokinen, groeifactoren (GF), enzymen, collagenen, enz.
Regelgevende vereisten voor N-Glycan-profilering
Volgens de ICH Q6B-richtlijn wordt “voor glycoproteïnen het koolhydraatgehalte (neutrale suikers, aminosuikers en siaalzuren) bepaald. Bovendien worden de structuur van de koolhydraatketens, het oligosacharidepatroon (antennair profiel) en de glycosyleringsplaats(en) van de polypeptideketen voor zover mogelijk geanalyseerd.
Analytische methode
| Analyse |
Methoden |
| N-glycaanprofilering |
Vloeistofchromatografie-massaspectrometrie (LC-MS) analyse van vrijgekomen en gelabelde glycanen |
procedures
1. Enzymatische glycaanafgifte met Peptide N-Glycosidase F (PNGase F)
2. Derivatisering van vrijgekomen glycanen door 2-aminobenzamide (2-AB)
3. Zuivering van de geoogste N-glycanen op een TSK Amide - 80-kolom als grote hoeveelheden detergentia, niet-vluchtige zouten of materialen met vrije aminogroepen aanwezig zijn
4. Etikettering door fluorescerend 2-aminobenzamide (2-AB)
5. LC-MS-analyse van gelabelde N-glycanen
6. Gegevensanalyse
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
