Deamidatie van zijketens van glutamine en asparagine is een veel voorkomende modificatie in termen van impact op de eigenschappen van eiwitbiofarmaceutica. Deamidatie kan optreden in glutamineresiduen, maar meestal in een veel lager tempo. De deamideringssnelheden worden beïnvloed door temperatuur, pH, lokale eiwitstructuur en flankerende aminoacylresiduen.
Yaohai BioPharma biedt een testservice voor aminozuurdeamidatie, waarmee u aminozuurdeamidatie kunt detecteren met behulp van vloeistofchromatografie-massaspectrometrie (LC-MS).
We zijn betrokken geweest bij de eiwitstructurele karakterisering van verschillende grote moleculen, waaronder recombinante subeenheidvaccins, nanobodies/VHHs/single-domein antilichamen (sdAbs), antilichaamfragmenten, hormonen/peptiden, cytokinen, groeifactoren (CF), enzymen, collagenen, enz.
Regelgevende vereisten voor aminozuurdeamidatie
Volgens de ICH Q6B-richtlijnen kunnen gedeamideerde vormen worden gedetecteerd en gekarakteriseerd met behulp van chromatografische, elektroforetische en/of andere relevante analytische methoden.
Analytische methodes
| Analyse |
Methoden |
| deamidatie |
Vloeistofchromatografie-massaspectrometrie (LC-MS) |
procedures
bijvoorbeeld asparaginezuurdeamidering
1. Enzymatische vertering
2. LC-MS onder de omstandigheden van hogedrukvloeistofchromatografie (HPLC).
3. Gegevensanalyse
Deamidatie van asparagine vindt plaats via een succinimide-tussenproduct (Suc), dat gevoelig is voor racemisatie en hydrolyse, wat vier Asp-isomeren oplevert, waaronder L-Asp, L-IsoAsp, D-Asp en D-IsoAsp.
In theorie zou Gin-deamidering vier overeenkomstige Glu-isomeren kunnen genereren via een proces dat vergelijkbaar is met Asn-deamidering.
De hoogoplossende massaspectrometrie identificeert gemakkelijk het massaverschil van 1 Da tussen Asn/Gln-bevattende peptiden en hun overeenkomstige gedeamideerde tegenhangers Asp/Glu.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
