De betekenis van downstream procesontwikkeling (DSP).
De gehele fermentatiebouillon bevat doeleiwit of plasmide, evenals product- en procesgerelateerde onzuiverheden, bijvoorbeeld aggregaten, microbiële celsubstraten, gastheerceleiwitten (HCP), gastheercel-DNA (HCD), endotoxine en antibiotica.
Daarom is het van cruciaal belang om een efficiënt DSP-zuiveringsproces te ontwerpen, om bepaalde onzuiverheden te verwijderen en een zeer zuivere en hoogwaardige medicijnsubstantie te produceren. Bovendien kan de optimalisatie van het zuiveringsproces helpen de productterugwinning te vergroten, de kosten te verlagen en de schaalbaarheid en reproduceerbaarheid van processen te verbeteren.
Trefwoorden: procesontwikkeling, optimalisatie en validatie, zuiveringsproces, chromatografie, eliminatie van onzuiverheden, HCP-verwijdering, HCD-eliminatie, endotoxine-verwijdering, denaturatie en hervouwing van eiwitten, VLP-assemblage, conjugatie
Toepassing: biofarmaceutische industrie, menselijke geneeskunde, diergeneeskunde, vaccin, recombinante biologische geneesmiddelen met grote moleculen, recombinante biologische geneesmiddelen, biologisch reagens
DSP-oplossingen van Yaohai Bio-Pharma
We hebben uitgebreide ervaring met het isoleren van doeleiwitten of plasmiden uit complexe matrices door het stroomafwaartse zuiveringsproces te ontwikkelen en te optimaliseren. Er zijn verschillende soorten eenheidsbewerkingen die geschikt zijn voor de zuivering van biologische producten, waaronder centrifugatie, filtratie, homogenisatie, alkalische lyse, ultrafiltratie, precipitatie, denaturatie en hervouwing van eiwitten, chromatografie, enz.
Onze beschikbare diensten voor zuiveringsontwikkeling omvatten:
- Ontwikkeling van het gehele zuiveringsproces vanaf het verzamelen van cellen of supernatant tot het uiteindelijke actieve ingrediënt.
- Optimalisatie van het zuiveringsproces op basis van product- en procesgerelateerde onzuiverheden om de productkwaliteit en veiligheid te verhogen, bijvoorbeeld HCP, HCD, endotoxine.
- Definitie en optimalisatie van sleutelparameters in één of meerdere eenheidsoperaties, waaronder cellyse, tangentiële stroomfiltratie, harsscreening, chromatografie, denaturatie en hervouwing van eiwitten, enz.
- Optimalisatie van processen in termen van kwaliteit, opbrengst, herstel, kosten en schaalbaarheid.
- Validatie van het stroomafwaartse zuiveringsproces.
- Op risico gebaseerde beoordeling van parameterbereiken en Design of Experiments (DoE) bij procesmodellering.
dienst Details
Gestandaardiseerde eiwit- of plasmidezuiveringsplatforms zijn gebaseerd op meerdere ruwe zuiveringsstappen en minder dan vier chromatografiestappen, inclusief opvangen, tussentijdse zuivering en polijsten.
| dienst Details |
Eenheidsoperaties |
parameters |
| Ruwe zuivering |
Centrifugatie |
Rotatiesnelheid, tijd |
| Homogenisatie onder hoge druk |
Totaal vastestofgehalte, druk, cycli |
| Continue alkalische lysis |
De verhouding tussen geresuspendeerde cellen en lyse-oplossing, lysetijd |
| Tangentiële stroomfiltratie |
Membraanmateriaal en poriegrootte, toevoerstroomsnelheid transmembraandruk (TMP), verhouding filtraatvolume tot membraanoppervlak |
| Neerslag |
Type neerslagmiddel en concentratie, additief, pH, temperatuur, tijd |
| Denaturatie en hervouwing |
Oplossen van lichaamseiwitten |
Concentratie denaturant (bijv. ureum, guanidine HCl, sterk ionisch wasmiddel), detergentia (bijv. natriumdodecylsulfaat, SDS), reductiemiddelen (bijv. dithiothreitol, DTT), chelaatvormers (ethyleendiaminetetra-azijnzuur, EDTA), temperatuur, tijd |
| Hervouwing van eiwitten |
Hervouwingsmethoden (verdunning, dialyse of SEC-hervouwing), eiwitconcentraties, buffers, pH, temperatuur, tijd, oxidatie- en reductiemiddelen (bijv. glutathion, GSH/geoxideerd glutathion, GSSH, DTT/GSSH, cysteïne/cystine), additieven met kleine moleculen (L-arginine, ureum, guanidine/HCl en wasmiddelen) |
| Opvangen, tussentijdse zuivering en polijsten |
AC (affiniteitschromatografie) |
Verschillende soorten chromatografiehars/kolom (bijv. AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), kolomlengte en -diameter, buffersamenstelling, injectievolume, samenstelling van de mobiele fase (adsorptie en desorptie), pH, stroomsnelheid, binding, Was- en elutieomstandigheden. |
| IEX (anion- of kationenuitwisselingschromatografie) |
| HIC (hydrofobe interactiechromatografie) |
| Ontzouting en/of grootte-uitsluitingschromatografie (SEC) |
| RPC (omgekeerde fasechromatografie) |
| MMC, Gemengde moduschromatografie |
Casestudy
Case 1
We krijgen de opdracht om het stroomafwaartse zuiveringsproces te ontwikkelen en te optimaliseren om de eiwitzuiverheid te verhogen van 85% naar 90% en tegelijkertijd de chromatografiestappen te verminderen.
Yaohai leverde een robuust en schaalbaar zuiveringsproces met 3 stappen chromatografie voor het doeleiwit, een bacteriële allergie. En de uiteindelijke zuiverheid bereikte 95%.
Case 2
Yaohai werd door onze klant aangesteld om het endotoxineverwijderingsproces van het virusachtige deeltjesvaccin (VLP) te optimaliseren.
Ons team voerde optimalisatie van de chromatografieparameters uit en bereidde een medicijnsubstantie met een zuiverheid van 98% en een endotoxineresidu van 12.8EU/mg.
Onze ervaringen
- We zijn betrokken geweest bij de ontwikkeling en productie van verschillende grote moleculen, waaronder recombinante subeenheidvaccins, VLP's, hormonen (insuline, GLP-1, groeihormoon), cytokines (Interleukine-2/IL-2, IL-15, IL-21 ), groeifactoren (EGF, FGF, NGF), nanobodies/single-domain antilichamen (sdAbs), enzymen, enz.
uitrusting
We gebruiken toonaangevende AKTA Pure-, AKTA Avant- en preparatieve HPLC-systemen voor de uitvoering van verschillende chromatografiemethoden, waaronder affiniteit, ionenuitwisseling, hydrofobe interactie, omgekeerde fase en grootte-uitsluitingschromatografie.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
