De Betekenis van Downstream Proces (DSP) Ontwikkeling
De gehele fermentaat bevat het doelwit eiwit of plasmid, evenals product- en procesgerelateerde onreinigheden, zoals aggregaten, microbiele celsubstraten, Host Cell Proteins (HCP), Host Cell DNA (HCD), endotoxinen en antibiotica.
Daarom is het cruciaal om een efficiënt DSP-purificatieproces te ontwerpen om bepaalde onreinigheden te verwijderen en een hooggepurificeerd en hoge-kwaliteit medicijn te produceren. Bovendien kan de optimalisatie van het purificatieproces helpen bij het verhogen van de productherstel, kostenverlaging en het verbeteren van de schaalbaarheid en herhaalbaarheid van het proces.
Trefwoorden: procesontwikkeling, optimalisatie en validatie, zuiveringsproces, chromatografie, verwijdering van onreinigheden, HCP-removal, HCD-eliminatie, endotoxineverwijdering, eiwitreductie en heropvouwing, VLP-assemblage, conjugatie
Toepassing: Biopharmaceutische industrie, humane geneeskunde, diergeneeskunde, vaccins, recombinante grote molecuulbiologica, recombinante biologica, biologische reagens
DSP-oplossingen van Yaohai Bio-Pharma
We hebben uitgebreide ervaring met het isoleren van doel-eiwitten of plasmiden uit complexe matrices door downstream-purificatieprocessen te ontwikkelen en te optimaliseren. Er zijn verschillende soorten eenheidoperaties die geschikt zijn voor de zuivering van biologica, waaronder centrifugatie, filtratie, homogenisatie, alkalische lysing, ultrafiltratie, precipitatie, eiwitreductie en heropvouwing, chromatografie, enz.
Onze beschikbare zuiveringontwikkelingsdiensten omvatten:
- Ontwikkeling van het volledige zuiveringsproces vanaf cel- of supernatantverzameling tot het eindelijke actieve ingrediënt.
- Optimalisatie van het zuiveringsproces op basis van product- en procesgerelateerde onreinigheden om de kwaliteit en veiligheid van het product te verbeteren, bijvoorbeeld HCP, HCD, endotoxine.
- Definitie en optimalisatie van sleutelparameters in een of meerdere eenheden operaties, waaronder cellysing, tangentiële stroomfiltratie, resinscreening, chromatografie, eiwittenatuur en heropvouwing, etc.
- Optimalisatie van het proces in termen van kwaliteit, opbrengst, herstel, kosten en schaalbaarheid.
- Validatie van het downstream-zuiveringsproces.
- Risicogebaseerd parameterbereik assessment en Design of Experiments (DoE) in procesmodellering.
Service Details
Gestandaardiseerde eiwit- of plasmidzuiveringplatforms zijn gebaseerd op meerdere ruwe zuiveringsstappen en minder dan 4 chromatografische stappen, inclusief vangst, tussenzuivering en polishing.
| Service Details |
Eenheidsoperaties |
Parameters |
| Ruwe Zuivering |
Centrifugerings |
Rotatiesnelheid, Tijd |
| Hogedrukhomogenisatie |
Totale vastestofinhoud, Druk, Cycli |
| Continue alkalische lysing |
Het verhoudingsgetal van opnieuw opgeloste cellen tot lyseoplossing, Lysetijd |
| Tangentieel stroomfiltering |
Membranemateriaal en porgrootte, Voedervloedsnelheid Transmembrane Druk (TMP), Verhouding van filtraatvolume tot membranoppervlak |
| Precipitatie |
Type en concentratie van precipitant, Additief, pH, Temperatuur, Tijd |
| Denaturalisatie en heropvouwing |
Oplosbaarheid van inclusiebodyeiwitten |
Denaturantiekonzentratie (bijv. Urea, Guanidine HCl, Sterke Ionische Detergenten), Detergenten (bijv. Sodium dodecyl sulfate, SDS), Reducering Agents (bijv. Dithiothreitol, DTT), Chelatormiddelen (Ethylenediaminetetraacetonzuur, EDTA), Temperatuur, Tijd |
| Proteïne heropvouwen |
Heropvouwmethode (verdundiging, dialyse of SEC-heropvouwing), Proteïnekonzentraties, Buffermiddelen, pH, Temperatuur, Tijd, Oxiderende en Reducerende Stoffen (bijv. Glutathion, GSH/ Oxydeerbaar Glutathion, GSSH, DTT/GSSH, Cysteïne/Cystine), Additieven van Kleine Moleculen (L-arginine, Urea, Guanidine/HCl, en Detergenten) |
| Vangen, Tussenpurificatie, en Polishing |
AC (Affiniteitschromatografie) |
Verschillende types chromatografieresina/kolom (bijv., AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), Kolomlengte en -diameter, Buffercompositie, Injectievolume, Mobile Fasecompositie (Adsorptie en Desorptie), pH, Vloedsnelheid, Bind-, Was- en Eluatievoorwaarden. |
| IEX (Anion of Cationwissel Chromatografie) |
| HIC (Hydrofobe Interactiechromatografie) |
| Ontzouting en/of grootteuitsluitingschromatografie (SEC) |
| RPC (Reversed Phase Chromatografie) |
| MMC, Mixed mode chromatografie |
Gevalstudie
CASE 1
Wij worden gevraagd om het downstream zuiveringsproces te ontwikkelen en te optimaliseren om de eiwitzuiverheid te verhogen van 85% naar 90%, terwijl we tegelijkertijd chromatografiestappen reduceren.
Yaohai leverde een robuust en schaalbaar zuiveringsproces met 3 chromatografiestappen voor het doeleiwit, een bacteriële allergie. De eindzuiverheid bereikte 95%.
CASE 2
Yaohai is aangewezen door onze klant om het proces voor verwijdering van endotoxines van het virusachtige deeltje (VLP) vaccin te optimaliseren.
Ons team heeft de chromatografieparameters geoptimaliseerd en een medicijnsubstantie voorbereid met een zuiverheid van 98% en een endotoxine-restant van 12,8EU/mg.
Onze ervaringen
- Wij zijn betrokken bij de ontwikkeling en productie van verschillende grote moleculen, waaronder recombinante subeenheid vaccins, VLP's, hormonen (insuline, GLP-1, groeihormoon), cytokines (Interleukine-2/IL-2, IL-15, IL-21), groeifactoren (EGF, FGF, NGF), nanolichamen/één-domein antilichamen (sdAbs), enzymen, enzovoort.
Apparatuur
Wij gebruiken de marktleidende AKTA Pure, AKTA Avant en Preparatieve HPLC-systemen voor het uitvoeren van verschillende chromatografische methoden, waaronder affiniteit, ionenuitwisseling, hydrofobe interactie, omgekeerde fase en grootte-exclusie chromatografie.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
