Recombinante eiwitten zien vaak oxidatie van blootgestelde zijketens van aminozuren, zoals tryptofaan (Trp) en methionine (Met), wat de fysische en chemische eigenschappen van eiwitten verandert. Deze veranderingen kunnen op hun beurt bijdragen aan het wijzigen van de biologische functies van de betrokken eiwitten, zoals verlies van binding, verminderde enzymatische activiteit, onverwacht snel afbreken. Eiwitten zijn belangrijke doelen voor oxidatieve reacties omdat ze snel reageren met oxidanten en talrijk zijn in cellen, extracellulaire weefsels en lichaamsvloeistoffen.
Daarom is het in de gaten houden van eiwitoxidatie cruciaal voor succesvolle ontwikkeling van biogene medicijnen.
Yaohai Bio-Pharma biedt een analyse service voor aminozuur oxidatie, waarmee u de oxidatie van aminozuren kunt bepalen door middel van Vloeistofchromatografie-Massa Spectrometrie (LC-MS).
Wij zijn betrokken bij de structuurkarakterisatie van eiwitten van verschillende grote moleculen, waaronder Recombinante Subeenheid Vaccins, Nanolichamen/VHHs/Enkel-domein-antilichamen (sdAbs), Antilichaamfragmenten, Hormonen/Peptiden, Cytokines, Groeifactoren (GF), Enzymen, Collagenen, enz.
Regelgevingseisen voor Aminozuuroxidatie
Volgens de ICH Q6B richtlijnen kunnen oxidatieve vormen worden gedetecteerd en gekarakteriseerd door chromatografische, elektroforetische en/of andere relevante analytische methoden (bijv., High Performance Liquid Chromatography (HPLC), capillaire elektroforese, massaspectrometrie, circulaire dichroïsmus).
Analytische methoden
| Analyse |
Methoden |
| Aminozuur Oxidatie |
LC-MS, Reversed-Phase High Performance Liquid Chromatography (RP-HPLC) of Hydrofobe Interactie Chromatografie High Performance Liquid Chromatography (HIC-HPLC) en massaspectrometrie |
Analytische Procedures
1. Steekproefbereiding
2. LC-MS
3. Data-analyse
Tryptofaan (Trp)-resten zijn bijzonder vatbaar voor oxidatie vanwege de hoge reactiviteit van het aromatische indool met reactieve zuurstofsoorten. Trp-oxidatie vereist enige blootstelling van Trp-resten die normaal gesproken ingebakken zitten in de driedimensionale structuur van het eiwit.
Toch, wanneer Trp-resten geoxideerd worden, kunnen ze zich omvormen tot een verscheidenheid aan producten met zeer verschillende eigenschappen ten opzichte van het oorspronkelijke Trp. De meest voorkomende weg voor Trp-oxidatie omvat de vorming van N-formylkinureine (Massaverschil: +32).
Een ander vaak geoxideerd aminozuur is methionien. Het zwavelatoom in de Met-rest kan ofwel één of twee zuurstofatomen accepteren, wat leidt tot de vorming van sulfoxide (Massaverschil: +16) of sulfone (Massaverschil: +32), overeenkomstig. Deze modificatie komt relatief vaak voor vanwege de typisch hoge oppervlakteblootstelling van Met.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
