Integriti mRNA
Kepentingan Analisis Integriti mRNA
mRNA diiktiraf kerana ketidakstabilan yang wujud dan terdedah kepada pemecahan dengan kehadiran faktor luaran, terutamanya semasa transkripsi in vitro (IVT) dan proses penulenan, di mana nuklease di mana-mana menimbulkan cabaran. Menilai integriti mRNA adalah penting dalam pembangunan seterusnya ubat berasaskan mRNA, memastikan kedua-dua keselamatan dan ketersediaan produk.
Yaohai-BioPharma menyediakan perkhidmatan ujian integriti mRNA yang komprehensif, menggunakan kaedah seperti elektroforesis gel agarose (AGE), elektroforesis kapilari (CEG), dan kromatografi cecair berprestasi tinggi (HPLC), mematuhi piawaian kualiti yang ketat untuk kedua-dua penyelidikan dan ujian klinikal.
Keperluan Kawal Selia untuk integriti mRNA
Menurut pertimbangan kawal selia WHO, “integriti struktur mRNA dianggap sebagai atribut kualiti kritikal untuk pembebasan mRNA. Oleh itu, kawalan diperlukan untuk integriti mRNA, peratusan mRNA utuh, peratusan serpihan mRNA dan sebagainya."
Kaedah Analisis
Analisis |
Kaedah |
integriti mRNA |
AGE, Agarosegel elektroforesis |
CGE,Elektroforesis kapilari |
CGE-LIF, Elektroforesis gel kapilari dengan pengesanan pendarfluor teraruh cahaya |
Integriti mRNA oleh Elektroforesis Gel Agarose
Elektroforesis gel agarose ialah teknik yang digunakan secara meluas untuk menilai integriti jumlah RNA. Ini melibatkan menjalankan sampel RNA pada gel agarosa pendenaturasi, diwarnai sama ada dengan etidium bromida atau SYBR Green. Gel denaturing, terdiri daripada agarose, memudahkan pemisahan RNA berdasarkan saiz apabila arus elektrik digunakan. Apabila RNA bercas negatif berhijrah ke arah hujung positif gel, serpihan yang lebih kecil bergerak lebih pantas, menghasilkan pengisihan berdasarkan saiz molekul RNA.
Integriti mRNA oleh Elektroforesis Gel Kapilari
Elektroforesis gel kapilari (CGE) berdiri sebagai pendekatan analisis resolusi tinggi yang penting untuk mengukur integriti molekul RNA mengikut panjang. Penilaian ini mempunyai kepentingan untuk jaminan kualiti, pemahaman potensi, dan pengoptimuman proses pembuatan. Sama seperti elektroforesis gel agarose, CGE menggunakan arus elektrik untuk mengasingkan serpihan RNA berdasarkan cas dan saiznya. Dalam CGE, kapilari diisi dengan matriks gel pemisah yang diselitkan dengan pewarna pendarfluor. Pergerakan RNA di sepanjang kapilari adalah bergantung pada saiznya, dan pengesanan dicapai menggunakan pengesan ultraungu (UV) atau pendarfluor (LIF) disebabkan cahaya.
EN
