Dalam proses penyediaan mRNA transkripsi in vitro (IVT), DNA plasmid linear diperlukan sebagai templat transkripsi untuk IVT dengan bantuan polimerase RNA T7. DNA plasmid berkualiti tinggi adalah penting untuk transkripsi in vitro.
Berdasarkan platform perkhidmatan penyediaan plasmid matang, Yaohai Bio-Pharma boleh menawarkan perkhidmatan penyediaan DNA plasmid linear dengan ketulenan tinggi dan standard tinggi untuk mencapai transkripsi IVT yang cekap.
Proses | Perkhidmatan Pilihan | Butiran Perkhidmatan | Tempoh Penghantaran (Hari Kerja) |
Penyediaan plasmid bulat | Sintesis gen | Sintesis gen (pihak ketiga) | 7-10 |
Penguatan plasmid | Penguatan plasmid | 2 | |
Pengekstrakan plasmid | |||
Penyediaan plasmid linear | Linearisasi dan penulenan plasmid | Linearisasi plasmid | 1 |
Pembersihan DNA linearisasi | |||
Kawalan kualiti DNA plasmid | Ketulenan kepekatan | Spektrofotometri ultraungu (UV). | 1-2 |
Konformasi plasmid | Elektroforesis gel agarose (AGE) | ||
Elektroforesis kapilari (CE)-pilihan | |||
mengenal pasti plasmid | Pengecaman enzim sekatan/ AGE |
Pemilihan kaedah linearisasi yang fleksibel
Pengoptimuman kaedah pengekstrakan dan penulenan DNA untuk mencapai kadar pemulihan yang tinggi.
Piawaian kawalan proses yang ketat, dengan kadar konformasi superhelik sampel plasmid untuk penyelidikan melebihi 80%.
Perkhidmatan penyediaan dan kawalan kualiti standard dan kecekapan tinggi yang tinggi untuk memenuhi keperluan eksperimen.
Mengambil produk mRNA_luciferase katalog Yaohai Bio-Pharma sebagai contoh, sampel plasmid templat transkripsi (gred penyelidikan) mempunyai nisbah superhelik lebih daripada 90%, nisbah linearisasi hampir 100%, dan nisbah transkripsi seterusnya sehingga 1:200 ( DNA plasmid linear:mRNA).
MRNA_luciferase yang diperoleh melalui penyediaan plasmid linear sebagai templat ditransfeksi ke dalam sel 293T, dan aktiviti tindak balas enzim-substrat dinilai 24 jam selepas pemindahan.
Isyarat aktiviti luciferase kuat yang jelas boleh dikesan, iaitu, protein luciferase dinyatakan dengan cekap, mencadangkan ketulenan templat transkripsi dapat memenuhi sepenuhnya keperluan penyediaan mRNA berkualiti tinggi.
Ujian Nisbah Plasmid Supercoiled
Pengesahan Ungkapan mRNA luciferase In Vitro