Berbanding dengan pengehadan enzimatik dua langkah, kaedah pengehadan ko-transkripsi satu langkah boleh mengurangkan aliran proses dengan ketara. Kaedah ini berorientasikan hasil dan melibatkan penambahan analog topi kepada tindak balas transkripsi in vitro (IVT). Analog topi boleh diperkenalkan pada permulaan transkripsi, dan mRNA dengan struktur topi boleh diperolehi setelah selesai transkripsi. Analog topi generasi ketiga semasa boleh mengelakkan pengehadan terbalik dan terus menambah struktur Cap 1 pada produk transkripsi.
Untuk pertimbangan imunogenisitas in vivo dan kecekapan penterjemahan mRNA, proses IVT selalunya menggunakan beberapa jenis NTP yang diubah suai, dan nukleotida yang diubah suai biasa ialah pseudouridine (Ψ), N1-methyl-pseudouri-dine (N1Ψ), dan 5-methylcytosine (5mC) .
Rajah: Gambar rajah mRNA Co-transcriptional and Capping Reaction
Butiran Perkhidmatan
Servis | Butiran Perkhidmatan | Tempoh Penghantaran (Hari Kerja) |
Pembatasan transkripsi bersama | Tindak balas transkrip in vitro (analog Cap Bersih) | 1-2 |
| Pengubahsuaian nukleotida (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Pembuangan templat DNA (DNase I) |
Pengoptimuman keadaan IVT - pilihan | Reka bentuk dan pengoptimuman komponen tindak balas | 3-7 |
Ciri-ciri kami
- Strategi Pengubahsuaian Nukleotida Terpelbagai
Pelbagai strategi pengubahsuaian nukleotida pilihan boleh meningkatkan ekspresi protein.
- Sistem Reaksi Dioptimumkan
Mencapai nisbah transkripsi yang tinggi dan kecekapan pengehadan tinggi.
Mencapai kadar pengehadan lebih daripada 95%.
Cegah kemerosotan mRNA dengan berkesan dengan mengawal ketat RNase dalam persekitaran eksperimen dan bahan habis pakai.
Kajian kes
Yaohai Bio-Pharma telah membina platform proses pengehadan bersama transkrip yang matang, menggunakan analog penutup bersih untuk menambah struktur Cap1 secara terus sambil mengelakkan pengehadan terbalik. Selepas sampel pra-rawatan dan pengesanan elektroforesis kapilari (CE) piawai, kadar pengehadan mRNA protein pendarfluor hijau (eGFP) dipertingkat boleh mencapai lebih daripada 95%.
kecekapan pengehadan mRNA eGFP lebih daripada 95%
EGFP mRNA dan mCherry mRNA yang disediakan oleh co-transcriptional capping masing-masing dipindahkan ke dalam sel 293T, dan isyarat pendarfluor yang kuat diperhatikan selepas 48h, menunjukkan bahawa mRNA dinyatakan dengan cekap dalam sel 293T.
Ekspresi mRNA eGFP dan mRNA mCherry dalam Sel 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
TIDAK
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
