Mengenai pengeluaran besar-besaran mRNA, transkripsi in vitro (IVT) adalah kaedah yang lebih cekap dan matang. Reaksi IVT menggunakan DNA plasmid linear yang mengandungi promoter T7 sebagai templat, dan mRNA disintesis dengan nukleosida trifosfat (NTP) sebagai substrat dengan kehadiran polimerase RNA T7.
Pengubahsuaian nukleotida ialah satu kejayaan dalam penerokaan mRNA, di mana molekul mRNA yang tidak diubah suai diiktiraf oleh sensor RNA intraselular untuk mengaktifkan imuniti semula jadi. Untuk pertimbangan imunogenisiti in vivo dan kecekapan penterjemahan mRNA, proses IVT biasanya menggunakan beberapa jenis NTP yang diubah suai, dan nukleotida yang diubah suai biasa ialah pseudouridine (Ψ), N1-metil-pseudouridine (N1Ψ), dan 5-metilcytosine (5mC).
Proses Transkripsi In Vitro mRNA
Gambar rajah tindak balas transkripsi in vitro (IVT).
Butiran Perkhidmatan
Perkhidmatan Pilihan | Butiran Perkhidmatan | Tempoh Penghantaran (Hari Kerja) |
Transkripsi in vitro (IVT) | IVT, Transkripsi in vitro | 1 |
| Pengubahsuaian nukleotida (Ψ/N1Ψ/5mC, dsb.) |
| Pembuangan templat DNA (DNase I) |
Pengoptimuman keadaan IVT - pilihan | Reka bentuk dan pengoptimuman komponen tindak balas IVT | 2-5 |
Ciri-ciri kami
- Strategi Pengubahsuaian Nukleotida Terpelbagai
Meningkatkan kestabilan mRNA dan ekspresi protein dalam vivo.
- Reka Bentuk dan Pengoptimuman Ujian Teliti
Penyediaan serpihan mRNA sehingga 10kb boleh dicapai.
Dengan mengoptimumkan keadaan tindak balas IVT, kadar transkripsi adalah sehingga 1:200.
Kawalan ketat RNase melalui persekitaran eksperimen dan bahan habis pakai boleh menghalang degradasi mRNA dengan berkesan.
Kajian kes
Sistem tindak balas IVT semasa secara kasarnya dioptimumkan untuk sistem sintetik dengan panjang kira-kira 100 nt, bukan untuk mRNA dengan panjang sewenang-wenangnya. Semakin panjang jujukan mRNA, semakin sukar untuk ditranskripsikan dan semakin terdedah kepada degradasi.
Untuk menyediakan jujukan mRNA tersuai dengan panjang kira-kira 10 kb, Yaohai Bio-Pharma telah berjaya menyediakan sampel berkualiti tinggi dengan nisbah transkripsi tinggi 1:135 dan memperoleh 135 μg produk mRNA yang dimurnikan pada mulanya selepas 1 μg plasmid linear. telah ditranskripsi secara in vitro melalui reka bentuk eksperimen yang ketat, pengoptimuman berterusan keadaan tindak balas, dan kawalan ketat RNase.
Mengenal pasti mRNA (Elektroforesis Gel Agarose)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
TIDAK
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
