Yaohai Bio-Pharma menyediakan circRNA berdasarkan sistem PIE (penjajaran ekson dan intron), yang bergantung pada fungsi penyambungan diri intron jenis I untuk mencapai kitaran RNA. Struktur PIE direka menggunakan gen T4 td atau gen prekursor tRNA yang hanyir, dan susunannya adalah seperti berikut:
Intron RNA dan serpihan ekson sokongan dibahagikan kepada dua bahagian (terminal 5' dan terminal 3'), di mana jujukan terminal 5' dipindahkan ke ekor jujukan sasaran, jujukan terminal 3' dimasukkan ke bahagian hadapan jujukan sasaran, dan jujukan gen sasaran dimasukkan di tengah.
Di bawah pemangkinan GTP, struktur PIE membawa kepada kitaran jujukan selain daripada intron. Digabungkan dengan strategi peningkatan kadar kitaran yang munasabah, Yaohai Bio-Pharma boleh mencapai kitaran jujukan sehingga 4 kb dengan kadar kitaran lebih daripada 80%.
Rajah 1. Peredaran in vitro circRNA berdasarkan sistem PIE
Butiran Perkhidmatan
| Proses | Perkhidmatan Pilihan | Butiran Perkhidmatan | Tempoh Penghantaran (hari bekerja) |
| reka bentuk dan pengoptimuman jujukan circRNA | Reka bentuk dan pengoptimuman urutan pengekodan | Penjajaran jujukan CDS Pengoptimuman kodon CDS | 1 |
| Reka bentuk dan pengoptimuman jujukan bukan pengekodan | Reka bentuk dan pengoptimuman jujukan intron dan ekson Reka bentuk jujukan lengan homolog dan pengoptimuman Reka bentuk jujukan spacer dan pengoptimuman | 1-2 |
Strategi Biasa untuk Reka Bentuk Jujukan mRNA
| Komponen CircRNA | Fungsi Biologi | Strategi Pengoptimuman |
| Urutan intron dan ekson dua terminal | Penyambungan diri intron bermangkin GTP untuk kitaran jujukan di luar intron. | Direka mengikut gen T4 td atau gen prekursor tRNA minyak ikan. |
| Pengekodan | IRES | Tapak pengecaman ribosom dalaman yang mengawal terjemahan circRNA. | Penyaringan jujukan tapak kemasukan ribosom dalaman (IRES) daripada sumber virus yang berbeza, contohnya EMCV, sumber CVB3. |
| CDS | Kawasan pengekodan protein, pengekodan jujukan untuk antigen, antibodi atau protein berfungsi lain. | Pengoptimuman kodon meningkatkan tahap terjemahan; kodon tidak optimum tertentu mungkin memainkan peranan dalam lipatan protein. |
| Bukan pengekodan | Urutan bukan pengekodan | Sasarkan miRNA atau protein untuk melaksanakan peraturan gen atau protein. | Menyasarkan tapak pengikatan khusus untuk miRNA atau protein boleh mengulangi urutan tapak pengikatan. |
Ciri-ciri kami
- Gabungan Sistem Kitaran PIE Dioptimumkan dengan strategi pengoptimuman yang munasabah untuk mencapai kadar kitaran lebih daripada 80%;
- Kerjasama Pasukan Pengoptimuman CDS yang canggih dengan pasukan algoritma AI profesional untuk melengkapkan pengoptimuman kodon rantau CDS;
- CircRNA Proses Matang dan Sempurna boleh dicapai dengan kecekapan kitaran tinggi, kestabilan tinggi dan kecekapan terjemahan yang tinggi.
Kajian kes
Yaohai Bio-Pharma melancarkan circRNA protein pendarfluor hijau (eGFP) yang dipertingkatkan produk kawalan, yang berasaskan sistem PIE untuk mencapai kitaran RNA.
Menggunakan reagen transfeksi konvensional, circRNA eGFP ditransfeksi ke dalam sel 293T, dan isyarat pendarfluor eGFP (hijau) boleh dikesan selepas 24j, yang akan dipertingkatkan selepas 48j. Isyarat pendarfluor masih boleh dikesan pada hari ke-7 dan hari ke-14 selepas pemindahan.
Pengesahan ekspresi in vitro circRNA eGFP
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
TIDAK
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
