5'-end capping ialah pengubahsuaian penting mRNA. mRNA dengan struktur penutup, terutamanya struktur Cap1, memudahkan mRNA mengelak tindak balas imun semula jadi dalam vivo, menghasilkan terjemahan protein yang cekap.
Penyekat enzimatik (kaedah dua langkah) ialah kaedah penyekatan mRNA konvensional, serupa dengan proses penyekatan dalam organisma eukariotik. Di bawah tindakan siri enzim, 7-methylguanine (m7G) dikaitkan dengan 5'-hujung mRNA melalui ikatan trifosfat 5'-5' dan menjalani pengubahsuaian metilasi untuk membentuk struktur topi Cap 1 (m7GpppN).
Gambar rajah pembentukan struktur topi semulajadi
Aliran tindak balas penutup enzimatik adalah seperti berikut:
DNA plasmid linearized digunakan sebagai templat untuk transkripsi in vitro (IVT) dengan kehadiran polimerase T7, dan mRNA dengan struktur penutup hujung 5' terbentuk selepas penulenan satu langkah menggunakan enzim capping vaccinia dan 2'-O -metiltransferase.
Butiran Perkhidmatan
Perkhidmatan Pilihan |
Butiran Perkhidmatan |
Tempoh Penghantaran (Hari) |
penutupan enzimatik mRNA |
Tindak balas penutup enzimatik |
1 |
Pengoptimuman tindak balas pengehadan - pilihan |
Reka bentuk dan pengoptimuman komponen tindak balas |
3 ~ 7 |
Ciri-ciri kami
- Reka bentuk dan pengoptimuman komponen tindak balas penutup
Komponen tindak balas capping dioptimumkan, dan pengeluaran transkrip mRNA meningkat dengan banyak.
- Pengesahan ekspresi in vitro
MRNA yang dihadkan ditransfeksi ke dalam sel 293T, dan ekspresi protein sasaran dapat dikesan.
Melalui kawalan ketat terhadap persekitaran eksperimen dan bahan habis pakai RNaseson, degradasi mRNA dicegah dengan berkesan.
Kajian kes
Platform mRNA Yaohai Bio-Pharma telah membina proses tindak balas penutup yang sempurna.
Untuk mRNA eGFP, pra-produk mRNA yang disediakan oleh penutupan enzimatik, isyarat pendarfluor eGFP (pendarfluor hijau) pada tahap tinggi boleh diperhatikan selepas memindahkan sel 293T selama 24 jam, yang dikesan oleh Western Blot (WB), menunjukkan bahawa protein sasaran protein pendarfluor hijau dipertingkatkan (eGFP) boleh dinyatakan dengan cekap secara in vitro.
Ungkapan mRNA eGFP Tertutup Enzimatik dalam Sel 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
TIDAK
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
