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사용자 정의 saRNA 합성

사용자 정의 saRNA 합성

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사용자 정의 saRNA 합성

자가 증폭형 mRNA(saRNA)는 복제체 RNA라고도 하며, 알파바이러스 또는 플라비바이러스에서 유래한 IVT(체외 전사) mRNA 서열과 바이러스 복제효소 유전자를 인코딩합니다. 바이러스 복제효소 유전자는 mRNA의 자가 증폭을 가능하게 하여 단백질 발현량을 증가시키고 비증폭형 mRNA에 비해 최소한의 RNA 용량으로 작동합니다. 또한 saRNA는 비교적 큰 분자(14kb 이상)입니다.

야오하이 바이오파마는 1000 nt~14000 nt 범위의 비증폭형 mRNA와 자가 증폭형 mRNA를 제공하기 위한 일련의 mRNA 합성 기술을 확립했습니다. 이는 서열 설계 및 최적화, IVT, 정제, 동결 건조 및 지질 나노입자(LNP) 캡슐화 등을 포함합니다. 모든 제품은 엄격한 품질 관리 기준 하에 출시됩니다.

그림 1. IVT mRNA의 구조적 특징: 전통적, 원형 및 자가 증폭형 mRNA.

자가 증폭형 mRNA의 서열 특징

자기 증폭 RNA는 알파바이러스에서 유래한 네 가지 비구조 단백질(각각 nsP1, nsP2, nsP3, nsP4로 지정됨)로 구성됩니다. 베네수엘라 말 뇌염 바이러스(VEEV)에서 유래된 것입니다. 이들 중 nsP1은 GTase와 N7MTase라는 두 가지 효소 활성을 보이며, nsP2는 RTPase 활성을 가지고 있어 IVT mRNA의 캡핑을 위해 Cap 0 구조를 생성하는 데 필수적입니다. 또한, nsP2는 프로테아제와 헬리카제로서 작용하여 전체 nsP 복합체의 복잡한 가공을 돕습니다. nsP3의 정확한 기능은 아직 밝혀지지 않았지만, 다양한 숙주 세포 단백질과 상호작용하며 숙주의 항바이러스 반응을 억제하는 데 기여합니다.

알파바이러스 하위유전체 프로모터(SGP) 영역은 관심 대상 유전자(GOI) 앞에 위치합니다. SGP 요소는 바이러스 nsP 단백질을 인코딩하는 서열의 읽기를 건너뛰어 GOI 전사의 시작을 촉진합니다.

그림 2. 야오하이 바이오-파마 RNASci 플랫폼에서 eGFP saRNA의 합성 및 세포 시험.

사용자 정의 saRNA 솔루션

SaRNA의 합성 프로토콜은 mRNA와 유사합니다: 맞춤 mRNA 합성

  • 서열 설계
  • 플라스미드 템플릿 준비
  • 체외 전사 (IVT)
  • mRNA 효소적 캡핑
  • mRNA 공전사 캡핑
  • mRNA 정제
  • mRNA 동결 건조화
  • LNP 캡슐화
  • 분석 및 테스트

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