היפתחות סודותיה של Extraction פלסמידים באיכות גבוהה

הפרדת פלזמידים היא שלב קריטי עבור חוקרים. כווסטורי גנים, הפלזמידים הם חיוניים במחקר חיסונים ובתרפיית גנים, שם איכות חשובה במיוחד. גורמי איכות מובילים כוללים את תכונת הסופרקוילה ואת התוכן האנדוטוקסיני. התקנות משתנות: FDA ≥80%, SMPA ≥85%, NMPA ≥90%, עם פחות מ-5% DNA לינארי/מעגלי פתוח. לקוחותמנים רבים מעדיפים ≥95% סופרקוילה. רמות אנדוטוקסין הן: מחקר (>50 EU/µg), טראנספקציה (<50 EU/µg), ובלעדיה של אנדוטוקסין (<0.1 EU/µg).

DNA של פלזמיד סופרקויל

הפלזמידים מ-Escherichia coli כולל DNA בסוגים: סופרקויל (SC), מעגלי פתוח (OC), ולינארי (L). יחס גבוה של SC משפר את יעילות הטראנספקציה והבעת הגנים. למשל, פלזמיד עם 85.45% SC יש לו טראנספקציה גבוהה פי 2.5, ופלזמיד עם 93.28% SC יש לו ביטוי HGF גבוה פי 1.8, מה שמאשר את העדיפות של DNA סופרקויל.

DNA מעגלית פתוחה: כאשר אחת מהרצפות של DNA דו-רצף נשברת, המבנה הסופרספירלי הופך לפזור, מה שיוצר פלזמיד מעגלי פתוח עם נפח גדול יותר שמתפשט לאט ביותר במהלך אלקטרופורזה וממוקם למעלה.

DNA ליניארי: כאשר שתי הרצפות של DNA פלזמיד נשברות, מתקבל מבנה ליניארי עם נפח יחסית קטן יותר שמתפשט מהר יותר מ-DNA מעגלי פתוח אך איטי יותר מ-DNA סופרספירלי, ממוקם בשני.

DNA סופרספירלי: שני הליצים מתעקלים יחדיו, מה שיוצר מבנה סופרספירלי מבוסס על הליקס של DNA. יש לו הנפח הקטן ביותר והוא מתפשט מהר ביותר במהלך אלקטרופורזה, ממוקם למטה.

ניתוח כמותי של תכונת הסופרספירלה

מעבדות משתמשות באלקטרופורזה בגל אגרוז (AGE) וב-Gel-Pro Analyzer כדי להעריך את תכונת הסופרספירלה באמצעות תמונות אלקטרופורזה. תמונה אחת מציגה 97.539% DNA סופרספירלי, בעוד שהשנייה מציגה 63.833% DNA סופרספירלי ו-36.167% DNA מעגלי פתוח (DNA ליניארי אינו נראה).

הסוד של אנדוטוקסין בפלזמידים

טוקסין סוף הוא רכיב של השכבה החיצונית של קיר התא של חיידקים גרם-שליליים, שמשוחרר לאחר מותם או ליזיסתם של החיידקים, ומכיל ליפופוליסכריד טóksיני A. במהלך הוצאת פלזמידים, טוקסין סוף נכנסת לפתרון הליזה, מה שמשפיע על יעילות ההעברה ומפעיל תגובות חיסוניות לא ספציפיות, מה שיגרום לתוצאות שווא במחקרים.

ניתוח כמותי וכיווני של טוקסין סוף

מבחן לימולוס אמביוטס לייזט (LAL) מגלה את הטוקסין סוף באמצעות תהליך אגלווטינציה עם 2-קיטו-3-דיאוקסיוקטאנית (KDO) בליפופוליסכריד (LPS). המבחן הוא כיווני וחצי-כמותי, והוא מצביע על קיומו של טוקסין סוף באמצעות קרישת או שינוי צבע כאשר הוא מערבב עם דגימות.

Yaohai Bio-Pharma מציעה פלזמידים עלובים ללא טוקסין סוף. הפיכת העבודה לחברת Yaohai תעלה את יעילות ההעברה והביטוי. הפלזמידים שנמסרים כוללים ≥95% פרופורציה של SC (ממוצעמ. 85%±10%) ורמת טוקסין סוף של ≤0.1, ≤0.01, או ≤0.005 EU/μg.

אנו גם מחפשים שותפים גלובליים, سواء מוסדיים או אישיים. אנו מציעים את השכר התחרותי ביותר בתעשייה. אם יש לכם שאלות כלשהן, אנא לא猶ס להתקשר אלינו: [email protected]