פתיחת הסודות של מיצוי פלסמיד באיכות גבוהה

מיצוי פלסמיד חיוני לחוקרים. בתור וקטורי גנים, פלסמידים חיוניים במחקר חיסונים ובריפוי גנטי, שבהם האיכות חשובה. גורמי האיכות העיקריים כוללים פרופורציה של מפותלת ותכולת אנדוטוקסין. התקנות משתנות: FDA ≥80%, SMPA ≥85%, NMPA ≥90%, עם <5% DNA ליניארי/עגול פתוח. לקוחות מעדיפים לעתים קרובות ≥95% מפותל. רמות האנדוטוקסין הן: מחקר (>50 EU/µg), טרנספקציה (<50 EU/µg), וללא אנדוטוקסין (<0.1 EU/µg).

דנ"א פלסמיד מפותל

פלסמידים מ-Escherichia coli כוללים DNA מפותל (SC), עגול פתוח (OC) וליניארי (L). פרופורציה גבוהה של SC מגבירה את היעילות והביטוי של טרנספקציה. לדוגמה, טרנספקציה של פלסמיד SC של 85.45% גבוהה פי 2.5, וביטוי HGF של פלסמיד SC של 93.28% גבוה פי 1.8, מה שמאשר את עליונותו של SC DNA.

DNA עגול פתוח: כאשר גדיל אחד של דנ"א דו-גדילי נשבר, המבנה המסולסל מתרופף, ויוצר פלסמיד עגול פתוח עם נפח גדול יותר הנודד הכי לאט במהלך האלקטרופורזה וממוקם בחלק העליון.

DNA ליניארי: כאשר שני גדילי הדנ"א של הפלסמיד נשברים, נוצר מבנה ליניארי, עם נפח קטן יותר יחסית הנודד מהר יותר מ-DNA עגול פתוח אך איטי יותר מ-DNA מפותל, הממוקם במקום השני.

DNA מפותל: שני סלילים משתלבים זה בזה, מתפתלים למבנה מפותל המבוסס על סליל ה-DNA. יש לו את הנפח הקטן ביותר והוא נודד הכי מהר במהלך אלקטרופורזה, ממוקם בתחתית.

ניתוח כמותי של פרופורציית Supercoiled

מעבדות משתמשות באלקטרופורזה של ג'ל אגרוז (AGE) וב-Gel-Pro Analyzer כדי לשפוט פרופורציה של סליל-על באמצעות תמונות אלקטרופורזה. תמונה אחת מראה 97.539% SC DNA, בעוד תמונה אחרת מציגה 63.833% SC ו-36.167% OC DNA (DNA ליניארי לא נראה).

סוד האנדוטוקסין בפלסמידים

אנדוטוקסין הוא מרכיב בשכבה החיצונית של דופן התא של חיידקים גראם שליליים, המשתחרר לאחר מוות או תמוגה של חיידקים, המכיל ליפופוליסכריד A רעיל. במהלך מיצוי פלסמיד, האנדוטוקסין חודר לתמיסת התמוגה, משפיע על יעילות ההעברה ומעורר תגובות חיסוניות לא ספציפיות, המובילות לתוצאות חיוביות שגויות בניסויים.

ניתוח כמותי ואיכותי של אנדוטוקסין

בדיקת Limulus amebocyte lysate (LAL) מזהה אנדוטוקסין באמצעות אגלוטינציה עם חומצה 2-keto-3-deoxyoctonic (KDO) בליפופוליסכריד (LPS). זה איכותי וכמותי למחצה, המצביע על נוכחות אנדוטוקסין באמצעות קרישה או שינוי צבע בעת ערבוב עם דגימות.

Yaohai Bio-Pharma מציעה פלסמידים נטולי אנדוטוקסין. מיקור חוץ ליאוהאי מגביר את יעילות הטרנספקציה והביטוי. לפלסמידים שנמסרו יש שיעור SC של ≥95% (ממוצע 85%±10%) ורמות אנדוטוקסין ≤0.1, ≤0.01 או ≤0.005 EU/μg.

אנחנו גם מחפשים באופן פעיל שותפים גלובליים מוסדיים או בודדים. אנו מציעים את הפיצוי התחרותי ביותר בענף. אם יש לך שאלות, אנא אל תהסס לפנות אלינו: [email protected]