הכנת IVT mRNA

שעתוק במבחנה (IVT) היא השיטה המועדפת להכנת mRNA, המסוגלת להניב מיקרוגרם למיליגרם של mRNA בקנה מידה מעבדתי. למטרות מחקר, ספקי ריאגנטים פיתחו מערכות תגובת IVT מגוונות המתאימות ל-mRNA באורך בינוני (1000-4000 נוקלאוטידים).

במאמר זה, נסכם את התעתוק במבחנה (IVT) של mRNA, כולל מערכת התגובה IVT הקונבנציונלית המשמשת בקנה מידה מעבדתי ומערכת התגובה IVT המתאימה ל-mRNA ארוך במיוחד (>9000 נוקלאוטידים).

ערכות מאפשרות מכסה משותפת עם CleanCap AG ומפחיתות את האימונוגניות עם m1ψ. DNase I מסיר שאריות DNA. תשואה נמוכה יכולה לנבוע מבעיות של ערבוב לקוי, חמצון מגיב או בעיות בתבניות DNA, אשר ניתן להפחית על ידי צנטריפוגה, ריאגנטים טריים, בקרות והתאמת כמות/זמן התגובה של התבנית.

Yaohai Bio-Pharma מספקת מוצרי IVT RNA טרומיים שונים (אבקה נוזלית/מיובשת בהקפאה) ומוצרים מוגמרים LNP, המקודדים חלבונים כגון חלבונים ניאון (eGFP, mCHERRY), לוציפראז, רקומבינאז Cre ואנטיגן OVA, כדי לעמוד בניסויים או פרויקטים שונים. צרכים.

מערכת IVT ל-mRNA ארוך במיוחד

IVT קונבנציונלי עשוי שלא לעבוד עבור mRNA ארוך מדי (>9000 nt). יש צורך בהבנה עמוקה והתאמה רציונלית של רכיבי IVT.

תבנית DNA: פלסמידים ליניאריזציה או תוצרי PCR עם רצפי פרומטור תואמים, מומסים ב-RNase ללא H2O. ריכוז תבנית DNA גבוה מ-40 ננומטר מומלץ לתנאי IVT אופטימליים.

DTT: שומר על פעילות האנזים במהלך שעתוק. יש להוסיף DTT טרי למאגר התגובה לפעילות אנזים מיטבית.

מעכב RNase: מעכב פעילות RNase ושומר על יציבות mRNA.

T7 RNA פולימראז: מזרז שעתוק DNA ל-RNA, המתאים לרצף הפרומטור. הפעילות של T7 RNA פולימראז מושפעת מיוני pH ומגנזיום.

יוני מגנזיום (Mg2+): קו-פקטור ל-RNA פולימראז. ריכוזים נמוכים מדי מפחיתים את יעילות השעתוק, בעוד שריכוזים גבוהים מדי מובילים לפירוק RNA. Free [Mg2+] צריך להיות מותאם על סמך ריכוז נוקלאוטידים. כל נוקלאוטיד משלט אחד [Mg2+], כך שריכוז [Mg2+] צריך לעלות על ריכוז הנוקלאוטיד הכולל.

נוקלאוזיד טריפוספטים (NTP): כמצעים, NTPs הם היחידות הבסיסיות של RNA. לריכוזי NTP מעל 7 mM יש השפעה חיובית על ייצור mRNA.

ספרמידין: מייצב קומפלקסים של DNA-אנזים וממריץ תגובות שעתוק; עם זאת, לריכוזים מוגזמים יש השפעות מעכבות. ריכוז spermidine המומלץ הוא בין 1 ל-3 mM.

Pyrophosphatase אנאורגני (PPase): נוסף לתגובות IVT כדי למנוע הצטברות של יוני פירופוספטים אנאורגניים (PPi), הימנעות מקלציה שלהם עם Mg2+ והבטחת מספיק Mg2+ חופשי.

מינוף טכנולוגיה חלוצית וחוויית IVT mRNA, Yaohai Bio-Pharma מספקת שירות IVT RNA חד פעמי, הכולל עיצוב רצף, הכנה של IVT RNA (עם mods m1ψ), מחזור RNA, טיהור, ייבוש בהקפאה, אנקפסולציה של LNP ובדיקות איכות.

אנחנו גם מחפשים באופן פעיל שותפים גלובליים מוסדיים או בודדים. אנו מציעים את הפיצוי התחרותי ביותר בענף. אם יש לך שאלות, אנא אל תהסס לפנות אלינו: [email protected]