הכנה של mRNA על ידי IVT

העתקה תאית (IVT) היא השיטה המועדפת להכנת mRNA, القادرة לייצר מיקרוגרמים עד מיליגרמים של mRNA ברמת המעבדה. למטרות מחקר, ספקי חומרים פיתחו מערכות תגובה IVT מרובות מתאימות ל-mRNA באורך בינוני (1000-4000 נוקלאוטידים).

במאמר זה נקצר את העתקה תאית (IVT) של mRNA, כולל את מערכת התגובה הרגילה שמשתמשת ברמת המעבדה ואת מערכת התגובה ה-HTV המתאימה ל-mRNA ארוך מאוד (>9000 נוקלאוטידים).

קיטים מאפשרים כיסוי-Co תאי עם CleanCap AG ומעטים את החסינות עם m1ψ. DNase I מסיר DNA שאר. תוצרת נמוכה יכולה להיווצר עקב ערבוב לקויה, חמצון חומרים או בעיות ב-DNA המודל, מה שאפשר להפחית על ידי צנטריפוגה, חומרים טריים, בדיקות ובהתאמת כמות המודל/זמן התגובה.

Yaohai Bio-Pharma מספקת מגוון מוצרים של RNA ה-IVT מוכנים מראש (סוזה/בקיעים קפואים) ותוצרי LNP, המnEnter Proteins כמו חלבונים פלורסנטיים (eGFP, mCHERRY), לוסיפראז, רקורסומן Cre ואנטיגן OVA, כדי לענות על צרכים שונים של ניסויים או פרוייקטים.

מערכת IVT למRNA ארוך מאוד

IVT קונבנציונלי עשוי לא לעבוד עבור mRNA ארוך מדי (>9000 nt). נדרשquired הבנת מעמיקים ושינוי הגיוני של רכיבי ה-IVT.

תבנית DNA: פלזמידים ישרים או תוצרות PCR עם סדרות מופעל מתאימות, محلולים במים H2O ללא RNase. מומלץ שיכוח תבנית DNA גבוה מ-40 nM לתנאים אופטימליים של IVT.

DTT: משמר את פעילות האנזים במהלך ההעתקה. יש להוסיף DTT טרי לבffer התגובה לקבלת פעילות אנזימית אופטימלית.

מונע RNase: מונע פעילות של RNase ומשמר את יציבותה של mRNA.

פולימראז T7 RNA: מזריק את הטרנסקריפציה של DNA לרNA, התואמת לסדרת המופרץ. פעילותה של פולימראז RNA T7 מושפעת מ-pH ומיונים של מגנזיום.

יונים של מגנזיום (Mg2+): קופקטור לפולימראז RNA. ריכוזים נמוכים מדי יורדים ביעילות הטרנסקריפציה, בעוד שריכוזים גבוהים מדי גורמים להרס rRNA. [Mg2+] חופשי צריך להיות מתוקן על פי ריכוז הנוקלאוטידים. כל נוקלאוטיד מחבר יון אחד של [Mg2+], לכן ריכוז [Mg2+] צריך לעלות על סך ריכוז הנוקלאוטידים.

נוקלאוסיד טריפוספטטים (NTP): כסובסטרטים, NTP הם היחידות הבסיסיות של rRNA. ריכוזי NTP מעל 7 mM ישפיעו בצורה חיובית על ייצור mRNA.

ספרמידין: מיציב את תרכובות ה-DNA-אנזים וממריץ תגובות טרנסקריפציה; עם זאת, ריכוזים מוגזמים ישפיעו בצורה עכיבה. ריכוז הספרמידין המומלץ הוא בין 1 ל-3 mM.

פירופוספטטז חסר אורגנית (PPase): הוסף לתגובותת反응ים כדי למנוע את הצטברותן של יונים פירופוספט אינורגניים (PPi), ומבטל את חיבורם עם Mg2+ ומבטיח כמות מספקת של Mg2+ חופשי.

באמצעות טכנולוגיה חדשנית וניסיון ב-IVT mRNA, Yaohai Bio-Pharma מציעה שירות מלא של RNA-IVT, כולל תכנון סדרה, הכנת RNA-IVT (עם מודיפיקציות m1ψ), ציקליזציה של RNA, טיהור, קירור, עטיפה ב-LNP והטמעת איכות.

אנו גם מחפשים שותפים גלובליים, سواء מוסדיים או אישיים. אנו מציעים את השכר התחרותי ביותר בתעשייה. אם יש לכם שאלות כלשהן, אנא לא猶ס להתקשר אלינו: [email protected]