טכנiques מתקדמות להרכבה של סינתזה בגאלה של גנים

הטכנולוגיהכנולוגיה להרכבה של שברים גדולים של DNA מפסים היא הפינה היסודית של סינתזה גנטית, וכוללת שיטות כמו BioBrick™, TAR, BglBrick, Golden Gate, רכיבי ג'יבסון, CPEC, ו-Overlap PCR. עקב הגבלות הטכנולוגיה הנוכחית בסינתזת די-אן-איי מדויקת באורך גן בצעד אחד, יש צורך לשלב טכניקות אסמבלי in vitro ו-in vivo כדי לאחד שברי אוליגו-נוקלאוטידים מסודרים לשבבים ארוכים של DNA.

טכניקות אסמבלי in vitro

הם מוגדרים למספר שיטות על פי גודל השבר והמאפיינים של הסדרה, עם דרישה משותפת לשימוש בעזורי כלים. PCR כפיפה, המבוסס על שיטת הפולימראז DNA, הוא פשוט ומהיר בפעולה. שיטות BioBrick ו-BglBrick, שמושתפות על יסוד איזושיזומרים, מאפשרות אסמבלה סטנדרטית, אם כי שיטת BioBrick אינה מתאימה עבור חלבונים מופעלים. שיטת קלאון Golden Gate, המבוססת על עזורי מגבלות מסוג IIS, מאפשרת ליגציה יעילת ללא תפרים של מספר שברים. שיטת הקבוצה Gibson, אשר משתמשת בקומבינציה של מספר כלים ביולוגיים, מאפשרת ליגציה ללא תפרים בגודל שברים המגיע לכמה מאות ק"ב. עיצוב סטנדרטי של רכיבי ה-DNA מגדיל את שיעור השימוש בשברים קיימים.

טכנiques של אסמבלה בתוך הגוף

למרות מחוץ לגוף שברים מאסם יכולים להגיע לגודל של כמה מאות ק"ב, אך התוצרת לעתים קרובות אינה מספיקה, מהדורש להגדיל באמצעות אורגניזמים כמו Escherichia coli. באסSEMBLY של שברים ארוכים מ-20 ק"ב, מוסדות רקורסיביים בתוך יצורים הם לעתים קרובות בשימוש, כולל Bacillus subtilis, שמרים, וחיידקים מהנדסים. שמרים, כמארח נפוץ, זכו להכרה על ידיעתם את היכולת של רקורסיה הומולוגית יעילה במשך שנים רבות. זה יכול לשמש כדי לבנות כרומוזומים מלאכותיים באורך של מספר מגה-בסיסים (Mb). בנוסף, Saccharomyces cerevisiae מראה סובלנות אדירה לאורך הכרומוזום, מספקת בסיס תיאורטי לשימוש בשרמים לבניית כרומוזומים ארוכים במיוחד ביצורים גבוהים.

יישומים

Yaohai Bio-Pharma משתמשת בעיקר בשתי שיטות אסיפה לסינתזה גנומית: אסיפת ליגאז ואסיפת פולימראז DNA. שיטת אסיפת הליגאז מחברת שברים של אולigonucleotide עם פוספורילציה ב-5' המהווים את החלקים ההיברידים והמתקבצים ל-DNA דו-שרירי באמצעות ליגאז DNA. שיטת האסיפה הפולימרית משתמשת בפולימראז DNA כדי להאריך את השברים ההיברידיים של האולigonucleotide דרך היברידיזציה, לקבל תערובת באורכים שונים, ובסוף להגדיל את השברים המלאים שהצליחו להיאסף באמצעות פריימים. Yaohai יכולה לעזור ללקוחות למלא דרישות ספציפיות בסינתזה גנומית.

אנו גם מחפשים שותפים גלובליים, سواء מוסדיים או אישיים. אנו מציעים את השכר התחרותי ביותר בתעשייה. אם יש לכם שאלות כלשהן, אנא לא猶ס להתקשר אלינו: [email protected]