mRNA מסונתז על ידי שעתוק במבחנה (IVT) מ-DNA פלסמיד ליניארי (pDNA). חלק מתוצרי לוואי נוצרים גם במהלך הליך IVT, כולל RNA דו-גדילי (dsRNA) המזוהה כטריגרים עיקריים למסלול החיסון המולד. זה קריטי להסיר זיהומים ולהשיג תשואות גבוהות של mRNA טהור ליישומי מחקר וטיפול ב-mRNA in vitro/vivo.
Yaohai Bio-Pharma הקימה סט של טכנולוגיות סינתזת mRNA כדי לספק mRNA טהור ביותר, כגון עיצוב ואופטימיזציה של רצף, IVT, טיהור, ליאופיליזציה ואנקפסולציה של ננו-חלקיקים של שומנים (LNP). כל המוצרים משוחררים תחת תקני בקרת איכות מחמירים. כרומטוגרפיה של זיקה (AC), המבוססת על אינטראקציה חזקה וסלקטיבית בין זנב polyA 3' של mRNA עם אוליגו dT פאזה נייחת, היא אסטרטגיית טיהור יעילה וניתנת להרחבה עבור mRNA.
תוצרים
המוצר |
mRNA טהור מאוד מותאם אישית |
אורך | 100~10,000 נוקלאוטידים |
תוכן RNA | 100 מיקרוגרם ~ 10 מ"ג (OD260) |
טוֹהַר | A260 / A280 |
זיהוי וטוהר |
אגרוס ג'ל אלקטרופורזה (AGE) אלקטרופורזה נימית (CE) |
בלם | מים ללא RNase (נוזל) |
משלוח | ספינה עם קרח יבש; או תחת טמפרטורת הסביבה |
אחסון |
● נוזל, ב-20 מעלות צלזיוס או מתחת ● אבקה ליאופילית, ב-4 מעלות צלזיוס |
בקשה |
פיתוח ניסוח LNP, מבחנים מבוססי תאים, ניסוי בבעלי חיים |
אפשרויות אחרות הניתנות להתאמה אישית
כובע 5' |
● לא מנוטרל ● Cap0, משותף ● Cap1, משותף ● Cap1, מכסה אנזימטי |
5' UTR/3' UTR |
● רצף UTR של הטבע ● רצף UTR מוטנטי/מהונדס |
זנב 3' PolyA |
● זנב 100A ~120A (מומלץ) ● זנב polyA מפולח ● זנב מותאם אישית אחר |
נוקלאוזידים שונה |
● בסיסים ללא שינוי, ● פסאודורידין (Ψ), ● N1-מתילפסאודורידין (N1Ψ), ● 5-מתילציטוזין (m5C), ● 5-מתילורידין (m5U), ● 5-methoxyuridine (5moU), ● 2-תיאורידין (s2U), ● 2'-O-methyl-U ● אחרים |
מקרה מבחן
פיתחנו תהליך טיהור כרומטוגרפי רב-שלבי והכנו mRNA עם טוהר ושלמות גבוהים (>95%).
איור. ניתוח של mRNA עם טוהר גבוה (~98%)