Identificazione e quantità della composizione lipidica dell'LNP
Il significato dell'analisi della composizione lipidica dell'LNP
Le nanoparticelle lipidiche (LNP), comprendenti lipidi cationici, colesterolo, fosfolipidi e lipidi coniugati con PEG, fungono da importanti sistemi di rilascio per i prodotti farmaceutici mRNA. La stabilità e la fluidità del doppio strato degli LNP dipendono dalle proprietà e dal contenuto dei vari lipidi utilizzati nel sistema di formulazione. La composizione dei lipidi è molto importante per la capacità degli LNP di rilasciare i farmaci.
Yaohai-BioPharma fornisce soluzioni per identificare e quantificare la composizione lipidica dell'mRNA-LNP utilizzando il metodo della cromatografia liquida ad alte prestazioni con rilevamento di aerosol caricato (HPLC-CAD).
Requisiti normativi per la composizione lipidica
Secondo le considerazioni normative dell’OMS, “La composizione finale del vaccino, compresi i lipidi, dovrebbe essere descritta insieme alla quantità dei componenti in ciascuna presentazione”.
Metodo analitico
Analisi | Metodi |
Composizione lipidica | HPLC combinato con rilevatore di aerosol caricato a corona (CAD) |
Procedura
Passaggio 1. Preparazione del campione lipidico
La scelta del diluente è di fondamentale importanza per l'analisi dei componenti lipidici nei prodotti farmaceutici mRNA-LNP. Il diluente dovrebbe dissolvere efficacemente ciascun componente lipidico e interrompere qualsiasi interazione tra i lipidi e l'mRNA incapsulato. I potenziali diluenti comprendono etanolo, etanolo/dimetilsolfossido (DMSO), etanolo/formammide, etanolo/trietilammina acetato e altri.
Passaggio 2. HPLC-CAD
La cromatografia liquida a fase inversa (RP-HPLC) abbinata a un rilevatore di aerosol carico (CAD) è stata incorporata nei test della composizione lipidica dell'LNP. Dato che i lipidi sono privi di cromofori e non assorbono la radiazione ultravioletta (UV) senza derivatizzazione, la volatilizzazione è generalmente complessa. La CAD, essendo più sensibile, può discernere uno spettro più ampio di contenuto lipidico. In precedenza, un metodo di cromatografia liquida ad altissime prestazioni (UHPLC) accoppiato con un rilevatore di aerosol caricato (CAD) veniva formulato e applicato nell'analisi dei lipidi per studi LNP su piccoli RNA interferenti (siRNA).
Passaggio 3. Analisi dei dati
La quantità di ciascun lipide all'interno del campione prevedeva calcoli derivati dalla curva standard moltiplicata per il fattore di diluizione. Questo processo ha prodotto il contenuto lipidico per ciascun costituente all'interno del campione di mRNA-LNP.
Caso di analisi della composizione lipidica LNP con HPLC-CAD
Basato su HPLC-CAD, Yaohai-BioPharma ha sviluppato un metodo robusto per l'analisi dei componenti lipidici dell'mRNA-LNP. Questo metodo è stato convalidato per essere lineare, ripetibile, preciso, accurato e specifico per le formulazioni LNP, in grado di supportare lo sviluppo del processo, lo sviluppo della formulazione, i test di stabilità e il rilascio di mRNA-LNP.
Profilo cromatografico di 4 lipidi mediante metodo HPLC-CAD di Yaohai-BioPharma
La linearità del metodo HPLC-CAD di Yaohai-BioPharma (R2＞0.99)
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