Plasmide : une petite molécule d'ADN circulaire avec un grand potentiel

Les plasmides, de petites molécules d'ADN circulaires, servent de vecteurs essentiels pour la recombinaison de l'ADN dans la recherche en biologie moléculaire et en thérapie génique. Le rendement et la qualité des plasmides sont cruciaux, la proportion de plasmides superenroulés et la teneur en endotoxines étant deux facteurs importants affectant la qualité des plasmides.

Sous-types de plasmides

Les plasmides extraits d'Escherichia coli (E. coli) existent sous plusieurs sous-types : formes superenroulées (SC), circulaires ouvertes (OC) et linéaires (L) (Figure 1). Parmi eux, les plasmides superenroulés présentent une excellente stabilité, une antigénicité et une efficacité de transfection et d'expression élevée.

Figure 1. Diagramme schématique des sous-types de plasmides courants

Dans l'électrophorèse sur gel d'agarose de l'ADN plasmidique, l'ordre de vitesse de migration est le suivant : ADN surenroulé, ADN linéaire et ADN circulaire ouvert (Figure 2).

Figure 2. Modèle de migration de différents sous-types de plasmides par électrophorèse sur gel d'agarose

Yaohai Bio-Pharma a continuellement amélioré ses processus et ses techniques pour garantir que la proportion de plasmides superenroulés de qualité transfection est ≥ 85 % et celle de plasmides de qualité recherche est ≥ 50 %. Voici une démonstration de cas (Figure 3), où l'électrophorèse sur gel d'agarose est combinée au logiciel Gel-Pro Analyzer pour détecter la proportion de plasmides superenroulés.

Figure 3. Résultats de l'inspection de la qualité de la proportion de plasmides superenroulés

Endotoxine

L'endotoxine, un composant de la paroi cellulaire des bactéries Gram-négatives, est principalement constituée de lipopolysaccharide A (LPS-A) comme composant toxique. Lors de l'extraction du plasmide, l'endotoxine est libérée dans la solution de lyse, ce qui affecte gravement l'efficacité de la transfection du plasmide dans les cellules. De plus, elle peut activer des réponses immunitaires non spécifiques dans les cellules, ce qui conduit à des résultats faussement positifs lors des expériences.

Yaohai Bio-Pharma adopte une approche de « non-introduction » et de « retrait élevé », contrôlant strictement l'utilisation de réactifs et de matériaux contenant des endotoxines tout au long du processus de purification. La société a également développé une méthode efficace d'élimination des endotoxines, offrant trois niveaux de teneur en endotoxines : ≤ 0.1 EU/µg, ≤ 0.01 EU/µg et ≤ 0.005 EU/µg.

Yaohai Bio-Pharma dispose d'une ligne de service d'extraction de plasmides à haut débit, capable de fournir 1 mg de plasmides extraits en une semaine seulement. Par défaut, elle fournit plus de sept tests de contrôle qualité (CQ) pour garantir la livraison de plasmides de haute qualité et de haut niveau sous plusieurs angles.

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