Plasmide : Une petite molécule d'ADN circulaire aux grands potentiels

Les plasmides, petites molécules d'ADN circulaires, servent de vecteurs essentiels pour la recombinaison d'ADN dans la recherche en biologie moléculaire et la thérapie génique. Le rendement et la qualité des plasmides sont cruciaux, avec la proportion de superenroulement et le contenu en endotoxines comme deux facteurs importants affectant la qualité des plasmides.

Sous-types de Plasmides

Les plasmides extraits d'Escherichia coli (E. coli) existent sous divers sous-types : formes superenroulées (SC), circulaires ouvertes (OC) et linéaires (L) (Figure 1). Parmi eux, les plasmides superenroulés présentent une excellente stabilité, antigenicité et une efficacité élevée de transfection et d'expression.

Figure 1. Diagramme schématique des sous-types de plasmides courants

Dans l'électrophorèse sur gel d'agarose de l'ADN de plasmide, l'ordre de vitesse de migration est l'ADN superenroulé, l'ADN linéaire et l'ADN circulaire ouvert (Figure 2).

Figure 2. Motif de migration par électrophorèse sur gel d'agarose des différents sous-types de plasmides

Yaohai Bio-Pharma a continuellement amélioré ses processus et techniques pour s'assurer que la proportion de superbobines des plasmides de grade transfection est ≥85 % et celle des plasmides de grade recherche est ≥50 %. Ce qui suit est une démonstration de cas (figure 3), où l'électrophorèse sur gel d'agarose est combinée avec le logiciel Gel-Pro Analyzer pour détecter la proportion de superbobines.

Figure 3. Résultats du contrôle qualité de la proportion de superbobines des plasmides

Endotoxine

Les endotoxines, un composant de la paroi cellulaire des bactéries à Gram négatif, consistent principalement en lipopolysaccharide A (LPS-A) comme composant toxique. Pendant l'extraction des plasmides, les endotoxines sont libérées dans la solution de lyse, affectant gravement l'efficacité de la transfection des plasmides dans les cellules. De plus, elles peuvent activer des réponses immunitaires non spécifiques dans les cellules, entraînant des faux positifs dans les expériences.

Yaohai Bio-Pharma adopte une approche de « non-introduction » et de « forte élimination », en contrôlant strictement l'utilisation de réactifs et de matériaux contenant des endotoxines tout au long du processus de purification. L'entreprise a également développé une méthode efficace d'élimination des endotoxines, offrant trois niveaux de teneur en endotoxine : ≤0,1 EU/µg, ≤0,01 EU/µg et ≤0,005 EU/µg.

Yaohai Bio-Pharma dispose d'une ligne de service d'extraction de plasmides à haut débit, capable de fournir 1 mg de plasmides extraits en aussi peu qu'une semaine. Par défaut, elle propose plus de sept tests de contrôle qualité (QC) pour garantir la livraison de plasmides de haute qualité et de haut standard sous différents angles.

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