Contrôle de la qualité et applications des protéines recombinantes

Le contrôle qualité des protéines recombinantes est crucial pour la fiabilité et la reproductibilité des données expérimentales. Chaque étape, de la conception du projet au processus de production, nécessite des stratégies de contrôle qualité rigoureuses.

Stratégies de Contrôle Qualité

Le secteur industriel suit des procédures opérationnelles standard strictes, tandis que la communauté académique doit renforcer ses connaissances professionnelles pour améliorer la reproductibilité des données. Les protéines ayant des applications biologiques spécifiques ou des caractéristiques biochimiques requièrent des stratégies de contrôle qualité (QC) sur mesure.

Exemples Délicats et Solutions

Yaohai Bio-Pharma bénéficie d'une vaste expérience en production et purification de protéines recombinantes, associée à une équipe d'experts, garantissant que votre production de protéines est réalisée avec une haute pureté. En nous appuyant sur notre expérience acquise à travers des centaines de projets, Yaohai résume aimablement comment optimiser la purification des protéines.

Protéines Liées aux Acides Nucléiques : Les étapes de suppression d'acides nucléiques, telles que les nucléases ou la précipitation par PEI, sont nécessaires. Le rapport A260nm/A280nm est surveillé pour détecter une contamination par des acides nucléiques.

Ferritine lourde de souris Chaîne 1 pour la cryo-EM : Les étapes de purification doivent être optimisées, et des nucléases doivent être ajoutées pour réduire le rapport A260nm/A280nm et garantir la pureté du protéine.

Protéine Chimérique Humaine dsRBEC : La lyse cellulaire utilise un tampon contenant de l'urée, suivie d'un renaturation en colonne pour obtenir des protéines fonctionnellement actives.

Protéines Liaison Cations Divalents : Des cations divalents spécifiques doivent être ajoutés pendant l'expression et la purification, et les agents chélateurs doivent être évités.

Protéines à Fer-Soufre : L'imidazole doit être évité pour ne pas perturber le cluster [2Fe ± 2S], garantissant ainsi un pliage et une fonction corrects de la protéine.

Fragment Soluble de LLT1 : Le design mutant optimise la formation de liaisons disulfure et le pliage des protéines, aboutissant à des protéines stables et à haut rendement.

Crystallisation de la kinase CLK1 : La co-expression avec la phosphatase λ enlève les phosphates des sites de phosphorylation, et la chromatographie par exclusion stérique (SEC) ainsi que la chromatographie d'échange anionique sont utilisées pour obtenir une CLK1 homogène sans phosphorylation hétérogène.

Protéines pour usage antigénique : L'évaluation de la pureté est nécessaire pour éviter la contamination par des protéines fortement immunogènes. Pour les anticorps épitopiques structuraux, la conformation tridimensionnelle de l'antigène doit être maintenue.

Protéines sujettes à l'agrégation : Des stratégies telles que le dépistage de souches différentes et la réduction des températures de culture sont employées pour limiter les problèmes d'agrégation, et des stratégies de purification rapide sont conçues.

Élimination des endotoxines : Des méthodes comme la chromatographie à charge positive et la chromatographie d'affinité par ligand polycationique éliminent les endotoxines, en veillant à ce que les niveaux de LPS restent sous les limites d'application.

Complexes de protéines : Les sous-unités sont exprimées séparément et assemblées in vitro ou co-exprimées pour former des complexes fonctionnels. L'intégrité du complexe est évaluée par l'homogénéité et la masse molaire.

Conclusion

La production de protéines commence par une conception stratégique, en tenant compte des caractéristiques biochimiques et des applications. Pendant l'expression, la purification et le contrôle qualité, les conditions et méthodes sont optimisées pour garantir la stabilité, l'absence d'agrégation et l'état natif. Les protéines purifiées servent à divers usages downstream, tels que la caractérisation biophysique.

Yaohai Bio-Pharma recherche également activement des partenaires institutionnels ou individuels à l'échelle mondiale et propose la rémunération la plus compétitive de l'industrie. Si vous avez des questions, n'hésitez pas à nous contacter : [email protected]