Contrôle de la qualité et applications des protéines recombinantes

Le contrôle qualité des protéines recombinantes est crucial pour la fiabilité et la reproductibilité des données expérimentales. Chaque étape, de la conception du projet au processus de production, nécessite des stratégies de contrôle qualité rigoureuses.

Stratégies de contrôle de la qualité

Le secteur industriel adhère à des procédures opérationnelles standard strictes, tandis que la communauté universitaire doit améliorer ses connaissances professionnelles pour améliorer la reproductibilité des données. Les protéines ayant des applications biologiques ou des caractéristiques biochimiques spécifiques nécessitent des stratégies de contrôle qualité (CQ) adaptées.

Exemples et solutions stimulants

Yaohai Bio-Pharma bénéficie d'une vaste expérience dans la production et la purification de protéines recombinantes, associée à une équipe d'experts, garantissant que votre production de protéines est réalisée avec une grande pureté. Tirant parti de notre expérience de centaines de projets, Yaohai résume avec gentillesse comment optimiser la purification des protéines.

Protéines de liaison aux acides nucléiques : Des étapes d'élimination des acides nucléiques, telles que les nucléases ou la précipitation PEI, sont nécessaires. Le rapport A260nm/A280nm est surveillé pour détecter la contamination des acides nucléiques.

Chaîne lourde de ferritine de souris 1 pour cryo-EM : Les étapes de purification doivent être optimisées et des nucléases doivent être ajoutées pour réduire le rapport A260nm/A280nm et garantir la pureté des protéines.

Protéine chimérique humaine dsRBEC : La lyse cellulaire utilise un tampon contenant de l'urée, suivi d'un repliement sur colonne pour obtenir des protéines fonctionnellement actives.

Protéines liant des cations divalents : Des cations divalents spécifiques doivent être ajoutés pendant l’expression et la purification, et les agents chélateurs doivent être évités.

Protéines fer-soufre : L'imidazole doit être évité pour éviter la perturbation du cluster [2Fe ± 2S], garantissant ainsi un repliement et une fonction corrects des protéines.

Fragment soluble de LLT1 : La conception mutante optimise la formation de liaisons disulfures et le repliement des protéines, ce qui donne des protéines stables et à haut rendement.

Cristallisation de la kinase CLK1 : La co-expression avec la λ-phosphatase élimine les phosphates des sites de phosphorylation, et la chromatographie d'exclusion de taille (SEC) et la chromatographie d'échange d'anions sont utilisées pour obtenir une CLK1 homogène sans phosphorylation hétérogène.

Protéines à usage antigénique : L'évaluation de la pureté est nécessaire pour éviter la contamination par des protéines hautement immunogènes. Pour les anticorps à épitopes structurels, la conformation tridimensionnelle de l'antigène doit être conservée.

Protéines sujettes à l’agrégation : Des stratégies telles que le criblage de différentes souches et l’abaissement des températures de culture sont employées pour limiter les problèmes d’agrégation, et des stratégies de purification rapide sont conçues.

Élimination des endotoxines : Des méthodes telles que la chromatographie à charge positive et la chromatographie d'affinité des ligands polycationiques éliminent les endotoxines, garantissant que les niveaux de LPS sont inférieurs aux limites d'application.

Complexes protéiques : Les sous-unités sont exprimées séparément et assemblées in vitro ou co-exprimées pour former des complexes fonctionnels. L'intégrité du complexe est évaluée par l'homogénéité et la masse molaire.

Conclusion

La production de protéines commence par une conception stratégique, prenant en compte les caractéristiques biochimiques et les applications. Lors de l'expression, de la purification et du contrôle qualité, les conditions et les méthodes sont optimisées pour la stabilité, la non-agrégation et l'état natif. Les protéines purifiées servent à diverses utilisations en aval, comme la caractérisation biophysique.

Yaohai Bio-Pharma recherche également activement des partenaires institutionnels ou individuels à l'échelle mondiale et propose la rémunération la plus compétitive du secteur. Si vous avez des questions, n'hésitez pas à nous contacter : [email protected]