5'-pään sulkeminen on olennainen mRNA:n modifikaatio. mRNA:t, joissa on cap-rakenne, erityisesti Cap1-rakenteet, helpottavat mRNA:t välttämään synnynnäisiä immuunivasteita in vivo, mikä johtaa tehokkaaseen proteiinien translaatioon.
Entsymaattinen katkaisu (kaksivaiheinen menetelmä) on perinteinen mRNA-suojausmenetelmä, joka on samanlainen kuin eukaryoottisten organismien capping-prosessi. Entsyymien sarjan vaikutuksesta 7-metyyliguaniini (m7G) kytkeytyy mRNA:n 5'-päähän 5'-5'-trifosfaattisidoksella ja käy läpi metylaatiomodifioinnin muodostaen cap-rakenteen Cap 1 (m7GpppN).
Kaavio luonnollisen korkin rakenteen muodostumisesta
Entsymaattinen sulkemisreaktiovirtaus on seuraava:
Linearisoitua plasmidi-DNA:ta käytetään templaattina in vitro -transkriptioon (IVT) T7-polymeraasin läsnä ollessa, ja mRNA, jolla on 5'-pään päätyrakenne, muodostuu yksivaiheisen puhdistuksen jälkeen käyttämällä vaccinia capping -entsyymiä ja 2'-O:ta. -metyylitransferaasi.
Palvelujen tiedot
Valinnainen palvelu | Palvelun yksityiskohdat | Toimitusaika (päivä) |
mRNA:n entsymaattinen rajoitus | Entsymaattinen sulkemisreaktio | 1 |
Kattoreaktion optimointi - valinnainen | Reaktiokomponenttien suunnittelu ja optimointi | 3 ~ 7 |
Ominaisuuksemme
- Korjausreaktiokomponentin suunnittelu ja optimointi
Korkkireaktiokomponentti on optimoitu ja mRNA-transkriptin tuotanto lisääntyy suuresti.
- In vitro -ilmentymisen todentaminen
Korjattu mRNA transfektoidaan 293T-soluihin, ja kohdeproteiinin ilmentyminen voidaan havaita.
RNaseson-koeympäristön ja kulutustarvikkeiden tiukan valvonnan avulla mRNA:n hajoaminen estetään tehokkaasti.
Tapaustutkimus
Yaohai Bio-Pharman mRNA-alusta on rakentanut täydellisen rajoitusreaktioprosessin.
eGFP mRNA:lle, mRNA:n esituotteelle, joka on valmistettu entsymaattisella korkituksella, korkeatasoinen eGFP-fluoresenssisignaali (vihreä fluoresenssi) voidaan havaita sen jälkeen, kun 293T-soluja on transfektoitu 24 tunnin ajan, mikä havaitaan Western Blotilla (WB), mikä osoittaa, että kohdeproteiinilla tehostettu vihreä fluoresoiva proteiini (eGFP) voidaan ilmentää tehokkaasti in vitro.
Entsymaattisesti suojatun eGFP-mRNA:n ilmentäminen 293T-solussa
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
EI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
