Verrattuna kaksivaiheiseen entsymaattiseen rajoitukseen, yksivaiheinen yhteistranskription katkaisumenetelmä voi vähentää merkittävästi prosessin kulkua. Menetelmä on tulosorientoitunut ja sisältää cap-analogien lisäämisen in vitro -transkriptioreaktioon (IVT). Cap-analogeja voidaan lisätä transkription alussa, ja cap-rakenteen omaava mRNA voidaan saada transkription päätyttyä. Nykyiset kolmannen sukupolven cap-analogit voivat välttää käänteisen rajauksen ja lisätä suoraan Cap 1 -rakenteen transkriptiotuotteeseen.
MRNA:n in vivo -immunogeenisyyden ja translaation tehokkuuden kannalta IVT-prosessissa käytetään usein tietynlaisia modifioituja NTP:itä, ja yleisiä muunnettuja nukleotideja ovat pseudouridiini (Ψ), N1-metyylipseudouridiini (N1Ψ) ja 5-metyylisytosiini (5 mC). .
Kuva: Kaavio mRNA:n yhteistranskriptio- ja korkkireaktiosta
Palvelun yksityiskohdat
Palvelu | Palvelun yksityiskohdat | Toimitusaika (työpäivä) |
Yhteistranskription rajaus | In vitro -transkriptiovaste (Clean Cap -analogi) | 1-2 |
| Nukleotidimuunnokset (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| DNA-templaatin poisto (DNaasi I) |
IVT-kunnon optimointi - valinnainen | Reaktiokomponenttien suunnittelu ja optimointi | 3-7 |
Ominaisuuksemme
- Monipuoliset nukleotidien modifiointistrategiat
Useat valinnaiset nukleotidimuunnosstrategiat voivat parantaa proteiinin ilmentymistä.
- Optimoitu reaktiojärjestelmä
Saavuta korkea transkriptiosuhde ja korkea rajaustehokkuus.
Saavuta yli 95 prosentin rajausaste.
Estä mRNA:n hajoaminen tehokkaasti kontrolloimalla RNaasi tiukasti koeympäristössä ja kulutustarvikkeissa.
Tapaustutkimus
Yaohai Bio-Pharma on rakentanut kypsän yhteistranskription rajausprosessialustan, joka käyttää puhtaita cap-analogeja lisätäkseen suoraan Cap1-rakenteen välttäen samalla käänteistä rajausta. Standardoidun näytteen esikäsittelyn ja kapillaarielektroforeesin (CE) havaitsemisen jälkeen tehostetun vihreän fluoresoivan proteiinin (eGFP) mRNA:n rajoitusnopeus voi olla yli 95 %.
eGFP mRNA:n rajoitusteho on yli 95 %
eGFP-mRNA ja mCherry-mRNA, jotka on valmistettu yhteistranskription kappauksella, transfektoidaan vastaavasti 293T-soluihin, ja voimakas fluoresoiva signaali havaitaan 48 tunnin kuluttua, mikä viittaa siihen, että mRNA ekspressoituu tehokkaasti 293T-soluissa.
eGFP mRNA:n ja mCherryn mRNA:n ilmentäminen 293T-solussa
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
EI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
