Mitä tulee mRNA:n massatuotantoon, in vitro -transkriptio (IVT) on tehokkaampi ja kypsempi menetelmä. IVT-reaktiossa käytetään linearisoitua plasmidi-DNA:ta, joka sisältää T7-promoottorin templaattina, ja mRNA syntetisoidaan substraateina nukleosiditrifosfaatilla (NTP:t) T7-RNA-polymeraasin läsnä ollessa.
Nukleotidimuunnos on läpimurto mRNA:n tutkimisessa, jossa solunsisäiset RNA-anturit tunnistavat modifioimattomat mRNA-molekyylit aktivoimaan synnynnäistä immuniteettia. MRNA:n in vivo -immunogeenisyyden ja translaation tehokkuuden kannalta IVT-prosessissa käytetään yleensä tietyn tyyppisiä modifioituja NTP:itä, ja yleisiä modifioituja nukleotideja ovat pseudouridiini (Ψ), N1-metyylipseudouridiini (N1Ψ) ja 5-metyylisytosiini (5 mC).
mRNA:n in vitro -transkriptioprosessi
In vitro -transkription (IVT) reaktiokaavio
Palvelujen tiedot
Valinnainen palvelu | Palvelun yksityiskohdat | Toimitusaika (työpäivä) |
In vitro -transkriptio (IVT) | IVT, In vitro -transkriptio | 1 |
| Nukleotidimuunnokset (Ψ/N1Ψ/5mC jne.) |
| DNA-templaatin poisto (DNaasi I) |
IVT-kunnon optimointi - valinnainen | IVT:n reaktiokomponenttien suunnittelu ja optimointi | 2-5 |
Ominaisuuksemme
- Monipuoliset nukleotidien modifiointistrategiat
Paranna mRNA:n stabiilisuutta ja proteiinien ilmentymistä in vivo.
- Tiukka testisuunnittelu ja optimointi
mRNA-fragmentin valmistus voidaan saavuttaa jopa 10 kb.
Optimoimalla IVT-reaktio-olosuhteet transkriptionopeus on jopa 1:200.
RNaasin tiukka kontrollointi kokeellisen ympäristön ja kulutustarvikkeiden avulla voi tehokkaasti estää mRNA:n hajoamisen.
Tapaustutkimus
Nykyinen IVT-reaktiojärjestelmä on karkeasti optimoitu synteettisille systeemeille, joiden pituus on noin 100 nt, ei mielivaltaisen pituisille mRNA:ille. Mitä pidempi mRNA-sekvenssi, sitä vaikeampi transkriptio on ja sitä alttiimpi se on hajoamaan.
Valmistaakseen räätälöityjä noin 10 kb:n pituisia mRNA-sekvenssejä Yaohai Bio-Pharma on onnistuneesti valmistanut korkealaatuisia näytteitä korkealla transkriptiosuhteella 1:135 ja saanut 135 μg alun perin puhdistettuja mRNA-tuotteita 1 μg:n linearisoitua plasmidia jälkeen. transkriptoitiin in vitro tiukan kokeellisen suunnittelun, reaktio-olosuhteiden jatkuvan optimoinnin ja RNaasin tiukan valvonnan avulla.
mRNA:n tunnistaminen (agaroosigeelielektroforeesi)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
EI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
