mRNA-voimakkuusmäärityksen merkitys
MRNA-rokotteiden ja terapeuttisten aineiden nopean kehityksen myötä tarvitaan erityinen analyysimenetelmien paneeli tehon testaamiseksi (määrittää niiden biologinen aktiivisuus), mukaan lukien mRNA:n translaatiotehokkuus. Nämä menetelmät perustuvat tyypillisesti solutransfektioon ja kohdeproteiinin toiminnallisiin määrityksiin.
Yaohai Bio-Pharma tarjoaa solupohjaisia tehomäärityksiä mRNA-lääkeaineille tai LNP-tuotteille, mukaan lukien solutransfektio (293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7-solut jne.) ja ELISA- tai Western Blotting (WB) -määritykset.
Tehokkuusmäärityksiä koskevat sääntelyvaatimukset
WHO:n lainsäädännöllisten näkökohtien mukaan "Lopullisen rokotteen jokaisen erän teho tulisi määrittää käyttämällä sopivasti kvantitatiivista ja validoitua toiminnallista menetelmää. Mahdollisiin in vitro -tehomäärityksiin voi kuulua solupohjaisia transfektiojärjestelmiä tai soluvapaita määrityksiä." Ja USP suositteli "solupohjaista määritystä" testaamaan mRNA:n tehoa, eli kohdeproteiinin ilmentymistä.
menettely
Vaihe 1. Solupohjainen transfektio mRNA:lla tai mRNA-LNP:llä
Soluja viljellään ja transfektoidaan mRNA:lla tai mRNA-LNP:llä. Yksityiskohtaisesti mRNA transfektoidaan sen jälkeen, kun se on sekoitettu transfektioreagenssin kanssa, kun taas mRNA-LNP transfektoidaan suoraan soluihin. 24-48 tunnin kuluttua selkeytä ekspressoidun proteiinin sisältävä supernatantti sentrifugoimalla.
Vaihe 2. Kohdeproteiinin toiminnalliset määritykset
Suorita ELISA- tai WB-määritykset kohdeproteiinien toiminnallisen sitoutumisen arvioimiseksi.
Tapaustutkimus
Solupohjaiset mRNA-näytteiden tehomääritykset
Yaohai-BioPharma on kehittänyt solupohjaisen tehonmääritysmenetelmän mRNA:lle, joka sisältää soluviljelyn, solutransfektion ja proteiinien funktionaalisia määrityksiä. Transfektoimme eGFP-mRNA:ta, mCherry-mRNA:ta, lusiferaasi-mRNA:ta, piikkiproteiinin mRNA:ta 293T-soluihin ja havaitsimme kohdeproteiinin fluoresenssin, luminoivan tai värillisen signaalin, WB:n, ELISA:n avulla.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
EI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
