In vitro-transkriptioon (IVT) mRNA:lle tarvitaan linearisoitua plasmidi-DNA:a transkriptioksi IVT:lle T7 RNA-polymeraasin avulla. Korkealaatuisen plasmidi-DNA:n käyttö on ratkaiseva in vitro-transkriptiolle.
Kokemukseen perustuen plasmidien valmistamisen palvelualustalla Yaohai Bio-Pharma tarjoaa high-purity, korkeakorkeuden linearisoituja plasmidi-DNA-valmistuspalveluita tehokkaan IVT-transkription saavuttamiseksi.
Prosessi | Valinnaiset palvelut | Palvelun yksityiskohdat | Toimitusaika (työpäivä) |
Kiertyvän plasmidin valmistus | Geeninsynteesi | Geenisynteesi (kolmannen osapuolen kanssa) | 7-10 |
Plasmidin lisääntyminen | Plasmidin lisääntyminen | 2 | |
Plasmidin eristys | |||
Lineaarisen plasmidiin valmistaminen | Plasmidin linearisointi ja puhdistus | Plasmidin linearisointi | 1 |
Linearisoitunut DNA-puhdistus | |||
Plasmidin DNA-laadun valvonta | Konsentraatio ja puhtaus | Ultraviolettispektrometria (UV) | 1-2 |
Plasmidin konformaatio | Agarosegelelektroforeesi (AGE) | ||
Kapillaarielektroforeesi (CE) - valinnainen | |||
Plasmidi tunnistaminen | Rajoitusensiimi-tunnistus/AGE |
Joustava linearisointimenetelmien valinta
DNA-eristämisen ja puhdistamismenetelmien optimointi korkeiden tuottavuuden saavuttamiseksi.
Tiukat prosessin hallintakriteerit, tutkimustarkoituksiin tarkoitettujen plasmidien superhelikaalinen muoto on yli 80%.
Korkean standardin ja tehokkaiden plasmidien valmistus- ja laadunvalvontapalveluita kokeiluntarpeiden täyttämiseksi.
Ottaen esimerkiksi Yaohai Bio-Pharm:n luettelotuotteen mRNA_luciferase, transkriptio-malliplasmidisammonta (tutkimustaso) on superhelikaalinen suhde yli 90%, linearisaatioaste lähellä 100% ja seuraava transkriptioaste saavuttaa suhteen 1:200 (linearisoitu plasmidi DNA:mRNA).
MRNA_luciferase, joka saadaan lineaarisen plasmidin valmistuksen kautta mallina, transfektoidaan 293T-soluihin, ja enzymi-substraatti-reaktion aktiivisuus arvioidaan 24 tuntia transfektion jälkeen.
On mahdollista havaita selvä voimakas luciferase-aktiivisuuden signaali, eli luciferase-proteiini ilmaantuu tehokkaasti, mikä osoittaa, että transkriptiomallin puhtaus voi täysin täyttää vaatimuksen korkealaatuisen mRNA:n valmistamisesta.
Ylärakenneplasmidi-suhdeanalyysi
Luciferase-mRNA-ilmaannuksen vahvistaminen in vitro