CircRNA:n valmistuksessa tarvitaan lineaarista RNA:a syötteeksi (RNA-esikunta) syklisointiin, jossa RNA-esikunta valmistetaan yleensä lineaarisella plasmidi-DNAn avulla transkriptio-mallina ja se transkriboidaan in vitro T7 RNA-polymeraasin avulla.
Korkealaatuinen plasmidi-DNA on välttämätön in vitro -transkriptiolle (IVT). Kypsyneen plasmidien valmistussa palvelualustan pohjalta Yaohai Bio-Pharma voi tarjota korkean puhtauden ja standardin lineaarisen plasmidi-DNA (pDNA) valmistuspalvelun IVT-tuotteiden kokonaisuuden varmistamiseksi.
Palveluiden yksityiskohdat
| Prosessi |
Valinnaiset palvelut |
Palvelun yksityiskohdat |
Toimitusaika (työpäivä) |
| Kiertyvän plasmidin valmistus |
Geeninsynteesi |
Geenisynteesi (kolmannen osapuolen kanssa) |
7-10 |
| Plasmidin lisääntyminen |
Plasmidin lisääntyminen |
2 |
| Plasmidin eristys |
| Lineaarisen plasmidiin valmistaminen |
Plasmidin linearisointi ja puhdistus |
Plasmidin linearisointi |
1 |
| Linearisoitunut DNA-puhdistus |
| Plasmidin DNA-laadun valvonta |
Konsentraatio ja puhtaus |
Ultraviolettispektrometria (UV) |
1-2 |
| Plasmidin konformaatio |
Agarosegelelektroforeesi (AGE) |
| Kapillaarielektroforeesi (CE) - valinnainen |
| Plasmidi tunnistaminen |
Rajoitusensiimi-tunnistus/AGE |
Ominaisuutemme
Joustava linearisointimenetelmien valinta
DNA-eristämisen ja puhdistamismenetelmien optimointi korkeiden tuottavuuden saavuttamiseksi.
Tiukat prosessin hallintakriteerit, tutkimustarkoituksiin tarkoitettujen plasmidien superhelikaalinen muoto on yli 80%.
- Kehittynyt alustaprosessi
Korkean standardin ja tehokkaiden plasmidien valmistus- ja laadunvalvontapalveluita kokeiluntarpeiden täyttämiseksi.
Tapaustutkimus
Ottaen esimerkiksi Yaohai Bio-Pharm:n tuotteen mCherry circRNA:n, transkriptiomalliplasmidien (tutkimustaso) superkierron suhde on yli 70 %, ja linearisaatioprosentti on lähes 100 %.
mCherry circRNA valmistetaan linearisoituneesta plasmidista mallina ja siirretään 293T-soluihin. Korkea fluoresenssien ilmaisu (punainen fluoresenssi) havaitaan 24 tunnin kuluttua siirtoon, mikä vahvistuu 48 tunnin kuluttua, ja sitä voidaan edelleen havaita seitsemännessä ja neljäteentoista päivänä siirron jälkeen.
mCherry-geeni ilmastosyy tuotetaan vakiona ja tehokkaasti, ja skriptauksen mallin puhtaus täyttää vaatimukset korkealaatuisen circRNA-lääkkeen tuotteen (DP) suhteen.
In vitro ilmausvalidointi mCherry circRNA:sta
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
