5'-päätepisteen kappaus on olennainen muutos mRNA:lle. Cap-rakenteilla varustetut mRNA:t, erityisesti Cap1-rakenteet, helpottavat mRNA:n välttämistä innate immune-vasteista elossa, mikä johtaa tehokkaaseen proteiinikääntämiseen.
Enzymatic capping (kahden vaiheen menetelmä) on perinteinen tapa mRNA:n kapataan, joka on samankaltainen kuin kapataanprosessi eukaryotic-organismissa. Sarjan enzyymien vaikutuksella 7-methylguanosyini (m7G) liittyy mRNA:n 5'-päätepisteeseen 5'-5' trifosfaatti-linkki kautta ja käy metyylaajennusmuunnoksessa, jolloin syntyy cap-rakenne Cap 1 (m7GpppN).
Luonnollisen cap-rakenteen muodostumisen kaavio
Enzymatic capping -reaktion virta on seuraava:
Linearisoitu plasmidi-DNA käytetään mallina in vitro-transkriptioon (IVT) T7-polymerasin läsnäollessa, ja mRNA:n 5'-päätepiste-cap-rakenne muodostuu yhden vaiheen puhdistuksen jälkeen vaccinia-capping-enzymen ja 2'-O-metyylikaantajien avulla.
Palveluiden yksityiskohdat
Valinnaiset palvelut |
Palvelun yksityiskohdat |
Toimitusaika (päivä) |
mRNA enzymikohtainen kattaminen |
Enzyyminen kappalemeisto |
1 |
Kappalemeiston optimointi - valinnainen |
Reaktiokomponenttien suunnittelu ja optimointi |
3~7 |
Ominaisuutemme
- Kappalemeistokomponentin suunnittelu ja optimointi
Kappalemeistokomponentti on optimoitu, ja mRNA-transkriptin tuotanto kasvaa huomattavasti.
- Verkkolaboratoriotodistus
Kappalellinen mRNA siirretään 293T-soluihin, ja kohdeproteiinin ilmaisin voidaan havaita.
Tiukasti ohjattavien RNasien kontrolloimalla kokeellisessa ympäristössä ja kulutusmateriaaleissa, mRNA:n hajoaminen estetään tehokkaasti.
Tapaustutkimus
Yaohai Bio-Pharma:n mRNA-alusta on kehittänyt täydellisen kappalemoottoriprosessin.
EGFP-mRNA:lle, joka valmistetaan enzyymillä tapahtuvalla kappalemoottorilla, voidaan havaita vahva eGFP- fluoresenssisignaali (vihreä fluoresenssi) 24 tunnin jälkeen siirtoon 293T-solujen kanssa, mikä todetaan Western Blot -menetelmällä (WB), osoittaen, että kohdesyöpä, lisätty vihreä fluoresoiva proteiini (eGFP), voidaan ilmaista tehokkaasti in vitro.
Enzyymillä kapsoitettu eGFP-mRNA:n ilmaisu 293T-soluissa
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
