Vertailtuna kahden vaiheen enzyymiselle kiinnitysmenetelmälle, yhden vaiheen ko-transkriptionaalinen kiinnityskeino voi merkittävästi vähentää prosessivirtaa. Menetelmä on tulosorientoitu ja se sisältää kapasyylikontekstin lisäämisen in vitro -transkriptioon (IVT). Kapasyylikontekstit voidaan ottaa käyttöön transkription alkamisessa, ja kaparakenteellinen mRNA saadaan valmiiksi transkription päätyttyä. Nykyiset kolmannen sukupolven kapasyylikontekstit voivat välttää käänteisen kiinnityksen ja lisätä suoraan Cap 1 -rakenteen transkription tuotteeseen.
Huomioon ottaen mRNA:n elinkaariset immunogeneettiset ominaisuudet ja käännösasteen tehokkuus, IVT-prosessissa käytetään usein joitakin muunneltuja NTP:itä, ja yleisiä muunneltuja nukleotideja ovat pseudouriidiini (Ψ), N1-metyyli-pseudouriidiini (N1Ψ) ja 5-metyylisytoosiini (5mC).
Kuva: Kaavio mRNA:n ko-transkriptionaalisesta ja kiinnitysreaktiosta
Palvelun yksityiskohdat
Palvelu |
Palvelun yksityiskohdat |
Toimitusaika (työpäivä) |
Ko-transkriptionaalinen kappaus |
In vitro -transkriptionaalinen vastaus (Clean Cap analog) |
1-2 |
| Nukleotiidimuokkaukset (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| DNA-mallin poisto (DNase I) |
IVT-olosuhteiden optimointi - valinnainen |
Reaktiokomponenttien suunnittelu ja optimointi |
3-7 |
Ominaisuutemme
- Monipuoliset nukleotiidimuokkaussuunnitelmät
Useita valinnaisia nukleotiidimuokkausstrategioita voidaan käyttää parantaakseen proteiinin esitystä.
- Optimoitu reaktiosysteemi
Saavuta korkea transkriptioverhontosuhde ja korkea kappaleiden tehokkuus.
Saavuta kappaleiden suhde yli 95 %.
Estä mRNA:n hajoaminen tehokkaasti tiukasti kontrolloimalla RNasea kokeellisessa ympäristössä ja kulutuksissa.
Tapaustutkimus
Yaohai Bio-Pharma on kehittänyt kypsyneen yhteistranskription kappaleprosessin alustan, jossa käytetään puhdasta kappeleena vastaavaa aineistoa lisätäkseen Cap1-rakenne suoraan samalla kun vältetään käänteinen kappale. Standardoidun näyteesikäsittelyn ja kapillaarielektroforeesin (CE) havainnoinnin jälkeen vahvistetun vihreän fluoresoivien proteiinin (eGFP) mRNA:n kappaleiden suhde voi saavuttaa yli 95 %:n.
eGFP mRNA:n kappaleiden tehokkuus yli 95 %
Yhteistranskription kappaleilla valmistettu eGFP mRNA ja mCherry mRNA siirretään erikseen 293T-soluihin, ja vahva fluoresoiva signaali havaitaan 48 tunnin kuluttua, mikä osoittaa, että mRNA ilmaantuu tehokkaasti 293T-soluihin.
EGFP mRNA:n ja mCherry mRNA:n ilmaantuminen 293T-soluissa
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
