MRNA:n massatuotannon osalta in vitro -transkriptio (IVT) on tehokkaampi ja kypsämpi menetelmä. IVT-reaktiossa käytetään lineaaristettua plasmidi-DNA:tä, joka sisältää T7-promoterin mallina, ja mRNA syntetoidaan nukleosiditrifosfaattien (NTP) käyttämisenä substraatina T7 RNA-polymeraasin läsnäoloissa.
Nukleotiidimuunnos on läpimurto mRNA:n tutkimisessa, sillä muuntamaton mRNA-molekyyli tunnistetaan solun sisäisillä RNA-sensorilla, jotka aktivoivat luonnollisen keuhkovekeisuuden. mRNA:n elinympäristön immunogeneettisten ominaisuuksien ja käännösefektiivisyyden perusteella IVT-prosessissa käytetään usein joitakin muunnettuja NTP:itä, ja yleisiä muunnettuja nukleotideja ovat pseudouridiini (Ψ), N1-metyyli-pseudouridiini (N1Ψ) ja 5-metyylisytoosi (5mC).
MRNA:n in vitro -transkriptio prosessi
In vitro -transkriptio (IVT) reaktiokuvio
Palveluiden yksityiskohdat
Valinnaiset palvelut |
Palvelun yksityiskohdat |
Toimitusaika (työpäivä) |
In vitro -transkriptio (IVT) |
IVT, in vitro -transkriptio |
1 |
| Nukleotiidimuokkaukset (Ψ/N1Ψ/5mC jne.) |
| DNA-mallin poisto (DNase I) |
IVT-olosuhteiden optimointi - valinnainen |
IVT-reaktiosuunnitelman suunnittelu ja optimointi |
2-5 |
Ominaisuutemme
- Monipuoliset nukleotiidimuokkaussuunnitelmät
Paranna mRNA:n vakautta ja proteiinilauseketta in vivo.
- Tiukka testisuunnittelu ja -optimointi
mRNA-fragmentin valmistus jopa 10kb on mahdollista.
Optimoimalla IVT-reaktioehdot, transkriptioaste on enintään 1:200.
Tiukka kontrolli RNasesta kokeellisessa ympäristössä ja kulutustarvikkeissa voi tehokkaasti estää mRNA:n hajoamisen.
Tapaustutkimus
Nykyinen IVT-reaktiosysteemi on noin optimoitu syntetisiin järjestelmiin, joilla on pituus noin 100 nt, ei mielivaltaisiin pituksiin oleviin mRNAt. Mitä pidempi mRNA-sekvenssi on, sitä vaikeampaa se on transkriboida ja sitä suurempi sen hajoamisen riski.
Jotta voidaan valmistaa mukautettuja mRNA-sekvenssejä, joiden pituus on noin 10 kb, Yaohai Bio-Pharma onnistui valmistamaan korkealaatuisia näytteitä korkealla transkriptioasteella 1:135 ja sai 135 μg alustesti puhdistettuja mRNA-tuotteita, kun 1 μg linearisoitua plasmidia transkriboitiin in vitro tiukan kokeellisen suunnittelun, jatkuvan reaktioehdojen optimoinnin ja tiukan RNase-kontrollin avulla.
mRNA-tunnistus (agarosgelieletroforeesi)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
