Mitä tulee RNA-prekursorien erävalmistukseen, yleisesti käytetty menetelmä on in vitro -transkriptio (IVT). IVT-reaktiossa käytetään linearisoitua plasmidi-DNA:ta, joka sisältää T7-promoottorin templaattina, ja syntetisoi RNA-prekursorin substraattina nukleosiditrifosfaatilla (NTP:t) T7-RNA-polymeraasin läsnä ollessa.
In vitro -syklisointimenetelmiin kuuluvat kemiallinen ligaatio, entsymaattinen ligaatio ja permutoitu introneksoni (PIE) -menetelmä. Kemiallinen ligaatio ja entsymaattinen ligaatio sopivat lyhyempien RNA:iden syklisointiin. Kun fragmentti on suurempi kuin 100 nt, syklisointinopeus laskee suuresti. Sitä vastoin PIE-järjestelmään perustuva nukleaasimenetelmä voi saavuttaa 8 kb:n sekvenssien syklisoinnin.
Guanosiinitrifosfaatin (GTP) katalyysin alaisena PIE-rakenne käy läpi intronien ulkopuolisten sekvenssien syklisoinnin. Yhdistettynä järkevään strategiaan syklisointinopeuden lisäämiseksi, Yaohai Bio-Pharma voi saavuttaa jopa 4 kb:n sekvenssien syklisoinnin yli 80 %:n syklisointiteholla.
RNA:n in vitro -syklisointireaktio kulkee seuraavasti:
RNA-prekursori syntetisoidaan in vitro -transkriptiolla, ja PIE-komponentti suorittaa itsesilmukoinnin loppuun GTP:n katalyysin alaisena muodostaen sircRNA:ta.
Palvelujen tiedot
| Käsitellä asiaa | Palvelun yksityiskohdat | Toimitusaika (työpäivä) |
| In vitro -transkriptio ja verenkierto | Reaktiojärjestelmän vahvistus | 1-2 |
| In vitro -transkriptio- ja syklisointireaktiot |
| RNaasi R:n pilkkominen |
| Reaktion optimointi | Reaktion koostumus, ajan optimointi | 2-5 |
Ominaisuuksemme
- Tiukka testisuunnittelu ja optimointi
Jopa 4 kb:n RNA-syklisaatiota voidaan saavuttaa.
- Korkea syklisointitehokkuus
Yli 80 %:n syklisointiaste voidaan saavuttaa järkevällä sekvenssin optimointistrategialla.
RNAasien tiukan kontrollin avulla koeympäristössä ja kulutustarvikkeissa RNA:n hajoaminen estetään tehokkaasti.
Tapaustutkimus
In vitro -syklisointi ja sircRNA:n rikastaminen
PIE-järjestelmään perustuen Yaohai Bio-Pharma on optimoinut sircRNA:n sekvenssin, jonka syklisaatioaste on yli 80 % agaroosigeelielektroforeesilla (AGE). Käyttämällä RNaasi R:ää sircRNA:n rikastamiseen, E-geelielektroforeesitulokset osoittavat, että lineaarinen RNA-prekursori pilkkoutuu, ja lisäpuhdistuksen jälkeen suurin osa lohkeamasta sircRNA:sta voidaan poistaa. Puhdistusliuoksen on itse kehittänyt Yaohai Bio-Pharma.
In vitro -kierto ja sircRNA:n rikastaminen
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
EI
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
