Kaikki kategoriat
In vitro -transkriptio ja sykli

In vitro -transkriptio ja sykli

RNA-esiketojen erävalmistuksessa yleisesti käytetty menetelmä on in vitro -transkriptio (IVT). IVT-reaktiossa käytetään linearisoitua plasmidi-DNA:ta, joka sisältää T7-promoterin mallina, ja se syntyyssii RNA-esiketon nukleosiditrifosfaattien (NTP) olemassaoloessa T7 RNA-polymeraasin kanssa.

In vitro -syklistysmenetelmiin kuuluvat kemiallinen liitos, enzyymiliaso ja permutoitu intron-exon (PIE) -menetelmä. Kemiallinen liitos ja enzyymiliaso sopivat paremmin lyhyempien RNA:molekyylien syklistykseen. Kun fragmentti on suurempi kuin 100 nt, syklistyshopeayhteen menee merkittävästi vähemmän. Vastaavasti PIE-järjestelmää perustuva nuklease-menetelmä voi saavuttaa 8 kb sekvenssin syklistyksen.

Guanosiinitrifosfaatin (GTP) katalyysissa PIE-rakenne kärsii ekstrainsuonien syklointia. Kombinoituna tehokkaalla strategialla nopeuttaakseen syklointinopeutta, Yaohai Bio-Pharma voi saavuttaa jopa 4 kb pituisen jonon sykloinnin, jonka syklointitehokkuus on yli 80 %.

undefined

RNA:n in vitro syklointireaktio kulkee seuraavasti:

RNA-alkuperäinen syntetoidaan in vitro -transkriptiolla, ja PIE-komponentti suorittaa itseispuistuksen GTP:n katalyysissa muodostaakseen circRNA:n.

undefined

Palveluiden yksityiskohdat
Prosessi Palvelun yksityiskohdat Toimitusaika (työpäivä)
In vitro -transkriptio ja sykli Reaktiosuunnitelman vahvistaminen 1-2
In vitro -transkriptio ja syklointireaktiot
RNase R haaroitus
Reaktioiden optimointi Reaktiosastot, ajan optimointi 2-5
Ominaisuutemme
    • Tiukka testisuunnittelu ja -optimointi

RNA-syklinen yli 4 kb voidaan saavuttaa.

    • Korkea syklimisvaikutusaste

Syklimisnopeus yli 80 % voidaan saavuttaa järkevän sekvenssioptimointistrategian avulla.

    • Tiukka RNase-kontrolli

Tiukasti valvomalla RNaseja kokeellisessa ympäristössä ja kulutuksissa RNA:n hajoaminen estetään tehokkaasti.

Tapaustutkimus

CircRNA:n in vitro sykliminen ja rikastus

PIE-järjestelmän perusteella Yaohai Bio-Pharma on optimoinut circRNA:n sekvenssin, jossa syklimisaste yli 80 % voidaan saavuttaa agarosegelelektrfoorin (AGE) avulla. Käyttämällä RNase R:ää circRNA rikastetaan, ja E-gelelektrfoorin tuloksista nähdään, että lineaarinen RNA-alkuperäinen materiaali hajotetaan, ja lisäpuistolla suurin osa katkaisemattomasta circRNA:sta voidaan poistaa. Puistosvässi kehitettiin itse Yaohai Bio-Pharmalla.

undefined

CircRNA:n in vitro sykliminen ja rikastus

Hanki Ilmainen Tarjous

Get in touch