Yaohai Bio-Pharma valmistelee circRNA PIE-järjestelmän (eksoneiden ja introneiden tasaus) perusteella, joka hyödyntää tyypin I intronien itsestistämisen toimintaa saavuttaakseen RNA-kiertokuvion. PIE-rakenne suunnitellaan käyttämällä T4 td-genea tai kalakantaisia tRNA-esikuntageneja, ja järjestys on seuraava:
RNA-intron ja tukeva eksoni fragmentti jaetaan kahteen osaan (5' päätepiste ja 3' päätepiste), joista 5' päätepistejono siirretään kohdejonojen hännälle, 3' päätepistejono lisätään kohdejonon edessä, ja kohdegeenijono liitetään keskelle.
GTP:n katalyysissa PIE-rakenne johtaa introneita paitsi mukaan lukien olevien sekvenssien kierronkyvyn. Yhdistettynä asianmukaiseen kiertokuvion vauhdittamisstrategiaan Yaohai Bio-Pharma voi saavuttaa jopa 4 kb mittaisen sekvenssin kierronkyvyn yli 80%:n.
Kuva 1. circRNA:n in vitro -kiertokulku PIE-järjestelmän perusteella
Palveluiden yksityiskohdat
| Prosessi |
Valinnaiset palvelut |
Palvelun yksityiskohdat |
Toimitusaika (työpäivä) |
| circRNA-sekvenssin suunnittelu ja optimointi |
Koodaavien sekvenssien suunnittelu ja optimointi |
CDS-sekvenssin tasaus
CDS-koodonin optimointi
|
1 |
| Ei-koodaavien jonojen suunnittelu ja optimointi |
Introni- ja eksoni-sekvenssien suunnittelu ja optimointi
Homologisen käsien sekvenssin suunnittelu ja optimointi
Avainsekkujen suunnittelu ja optimointi
|
1-2 |
Yleiset strategiat mRNA-sekvenssien suunnitteluun
| CircRNA-komponentit |
Biologiset toiminnot |
Optimointistrategiat |
| Kahden päässä olevat intronit ja eksonet |
GTP-katalyysoitu intronin itse-spliceaus sekvenssien ympyröitymiseksi intronin ulkopuolella. |
Suunniteltu T4 td-geenin tai kalasten rasvan tRNA-esikoneen perusteella. |
| Koodaus |
IRES |
Sisäinen ribosomiintunnistuspaikka, joka säätelee circRNA:n kääntämistä. |
Sisäisen ribosomiin pääsytilan (IRES) sekvenssien testaus eri viraalisten lähteiden, esimerkiksi EMCV, CVB3 lähteistä. |
| CDS |
Proteiinikoodaavat alueet, sekvenssit, jotka koodaavat antigenneille, antikehilloille tai muihin toimiville proteiineille. |
Kodonin optimointi lisää käännettävyyden tasoa; tietyt ei-optimaaliset kodonit saattavat vaikuttaa proteiinin rakennealueeseen. |
| Ei-koodaava |
Ei-koodaavat sekvenssit |
Tavoitteena on miRNA- tai proteiinihallinta vaikuttaakseen geenien tai proteiinien säätelyyn. |
Tavoitteena on tiettyjen sitopaikkojen sidonta miRNA: lle tai proteiinille, mikä voi toistaa sitopaikkojen sekvenssejä. |
Ominaisuutemme
- Optimoitu PIE-sykliysijärjestelmä yhdistetty järkevien optimointistrategioiden kanssa saavuttaakseen sykliysinopeuden yli 80%;
- Edellinen CDS-optimointiryhmä yhteistyössä ammattimaisen tekoälyalgoritmi-ryhmän kanssa suorittamaan CDS-alueen kodonien optimoinnin;
- Kokemus ja täydellinen prosessi circRNA:sta voidaan saavuttaa korkealla syklointiteholla, korkealla vakaudella ja korkealla käännös teholla.
Tapaustutkimus
Yaohai Bio-Pharma julkaisi kontrollituotteen, vahvistetun vihreän fluoresenssiproteiinin (eGFP) circRNA:n, joka perustuu PIE-järjestelmään RNA:n sykloinnin saavuttamiseksi.
Käyttämällä perinteistä transfektioaineesta eGFP circRNA transfektoidaan 293T-soluihin, ja eGFP:n (vihreä) fluoresenssisignaali voidaan havaita 24 tunnin kuluttua, mikä vahvistuu 48 tunnin kuluttua. Floresenssisignaali voidaan edelleen havaita seitsemän päivän ja neljätoista päivän kuluttua transfektion jälkeen.
EGFP circRNA:n in vitro -ilmausvalidointi
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
