Solupohjaiset tehokkuustestejä
MRNA-voimakkuustestin merkitys
MRNA-rokotteiden ja hoitoaineiden nopeasti kehittyvän kentän myötä tarvitaan tiettyjä analyysimenetelmiä voimakkuuden (biologisen aktiivisuuden määrittämiseksi) testaamiseen, jotka koskevat mRNA:n käännösefektiivisyyttä. Nämä menetelmät perustuvat yleensä solutransfektioksiin ja kohdeproteiinin funktionaalisiin testeihin.
Yaohai Bio-Pharma tarjoaa solupohjaisia voimakkuustestejä mRNA-lääkeyhdisteille tai LNP-tuotteille, mukaan lukien solutransfektiot (293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 solut jne.) sekä ELISA- tai Western Blotting (WB)-testit.
Säädösten vaatimukset voimakkuustesteille
WHO:n sääntelyhuomioissa sanotaan: “Jokaisen lohkon lopullisen rokotteen voimakkuuden tulisi määritellä sopivalla ja validoidulla toiminnallisella menetelmällä. Mahdollisia in vitro -voimakkuustestejä voivat sisältää solupohjaiset transfektiomenetelmät tai soluttomat testit.” USP suosittelee “solupohjaista analyysia” mRNA:n voimakkuuden testaamiseksi, eli kohdeproteiinin ilmaisua.
Analyyttinen menetelmä
|
Analyysi
|
Menetelmät
|
|
Voimakkuustestit
|
Solupohjainen transfektio ja kohdeproteiinin tunnistus:
293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 solut jne.
|
Toimenpide
Vaihe 1. Solupohjainen transfektio mRNA:lla tai mRNA-LNP:llä
Solut kasvatetaan ja transfektoidaan mRNA:lla tai mRNA-LNP:llä. Tarkemmin sanottuna, mRNA sekoitetaan transfektioaineeseen ennen siirtämistä, kun taas mRNA-LNP transfektoidaan suoraan soluihin. 24-48 tunnin kuluttua keskittele ilmaantunut proteiini supernaatantti centrifugoinnilla.
Vaihe 2. Kohdeproteiinin toiminnalliset testit
Suorita ELISA- tai WB-koekulut arvioimaan kohdeproteiinien funktionaalista sidontaa.
Tapaustutkimus
Solupohjaiset tehokkuuskokeet mRNA-näytteille
Yaohai-BioPharma on kehittänyt solupohjaisen tehokkuuskokeen menetelmän mRNA:lle, joka sisältää solukasvatussa, solun transfeksion ja proteiinin funktionaaliset koekulut. Transfeksoidimme eGFP-mRNA:ta, mCherry-mRNA:ta, luciferase-mRNA:ta ja spike-proteiini-mRNA:ta 293T-soluihin ja havaittiin kohdeproteiini fluoresenssinsäteilyn, luminesenssin tai värisignaalin sekä WB:n ja ELISA:n avulla.
Solupohjaiset tehokkuuskokeet mRNA-tuotteille Yaohai Bio-Pharmalta
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
