تولید پروتئین بازسازی شده: استرایک های مهندسی شده E. coli

ایشریچیا کلی (E. coli) نقش مهمی در تولید پروتئین‌های بازتولیدی در صنعت بیوفارما سی ایفا کرده است و به عنوان اولین بردار عبارت‌گذاری برای تولید داروهای زیستی شناخته می‌شود. E. coli رشد سریع، عملیات ژنتیکی آسان و تولید سریع پروتئین‌های بازتولیدی از جمله مزایای آن است. تغییرات فراوان این باکتری آن را به یک گزینه مناسب برای عبارت‌گذاری پروتئین تبدیل کرده است و منجر به طراحی انواع استرایک‌های مهندسی شده از E. coli شده است.

شرکت Yaohai Bio-Pharma متخصص ارائه خدمات خارج‌بندی یکپارچه برای فرآورش، تصفیه، توسعه فرمولاسیون و تولید سری از بیوفارماها با استفاده از سیستم‌های عبارت‌گذاری E. coli است. با توجه به تجربه گسترده Yaohai، خلاصه کردیم که چهار استرایک رایج E. coli برای تولید پروتئین‌های بازتولیدی استفاده می‌شود و ویژگی‌های آن‌ها را توضیح دادیم.

استرایک BL 21

مشتق شده از نسل E. coli B، استراین BL21 از پروتئاز لون و پروتئاز بیرونی OmpT محروم است. پروتئاز لون به طور اصلی پروتئین‌های خارجی را تجزیه می‌کند، در حالی که OmpT عمدتاً پروتئین‌های ماتریس خارجی را تخریب می‌کند. عدم وجود این دو پروتئاز کلیدی می‌تواند تجزیه پروتئین‌های بازگشتی را به طور مؤثر جلوگیری کند.

استراین Origami

استراین Origami، که از مشتق E. coli K-12 است، جهش‌هایی در تیوردوکسین ردناس و گلوتاتیون ردناس دارد که به فرماسیون پروتئین‌های درست شده حاوی پیوندهای گوگردی-گوگردی کمک می‌کند و محلول‌پذیری پروتئین را افزایش می‌دهد. استراین Origami، شامل Origami، Origami 2 و Origami B، مناسب برای بیان پروتئین‌های فعال حاوی پیوندهای گوگردی-گوگردی است.

استراین SHuffle

استرس شافل به طور مداوم ژن آنزیم DsbC که ایزومراز پیوند دیسولفید است را در سیتوپلاسم بیان می‌کند، که این موضوع به شکل‌گیری پیوندهای دیسولفید صحیح در پروتئین‌های اکسیده شده کمک می‌کند. همچنین این آنزیم به عنوان یک کمک‌خودکار مولکولی برای جمع‌بندی پروتئین عمل می‌کند و در شکل‌گیری ساختار صحیح پروتئین کمک می‌کند.

استرس روزتا

استرس روزتا با تکمیل tRNAهای متناظر با کدون‌های نادر در E. coli، بهبود سطح بیان ژن‌های خارجی، به ویژه ژن‌های یوکاریوتی، در سیستم‌های پروکاریوتی را هدف قرار می‌دهد. این استرس از BL21 مشتق شده است و دارای پلاسمید pRARE مقاوم به کلورامفنیکول است که شش tRNA متناظر با کدون‌های نادر (AUA، AGG، AGA، CUA، CCC و GGA) که ابتدا در E. coli وجود نداشتند را تکمیل می‌کند، این موضوع یک بیان پروتئینی «عمومی‌تر» فراهم می‌آورد.

نتیجه گیری

سه فاکتور اصلی برای تولید موفقیت‌آمیز پروتئین‌های بازتولیدی شامل میزبان، وکتور و شرایط فرهنگ است. بر اساس درک خواص فیزیکوشیمیایی پروتئین بازتولیدی، مزایای منحصر به فرد هر استریپ و نیازهای خاص آزمایش، میزبان مناسب‌ترین باید انتخاب شود. علاوه بر این، فاکتورهایی مانند وکتورهای پلاسمید، دما و روان‌کننده‌ها باید بهینه‌سازی شوند تا بیان پروتئین را افزایش دهند.

شرکت Yaohai Bio-Pharma نیز به طور فعال در حال جستجوی همکاران سازمانی یا فردی در سطح جهانی است و کمپنسیشن رقابتی‌ترین صنعت را ارائه می‌دهد. اگر سوالی دارید، لطفاً آزادانه با ما تماس بگیرید: [email protected]