تکنیک‌های مونتاژ نوآورانه برای سنتز ژن در مقیاس بزرگ

فن آوری مونتاژ برای سنتز قطعات بزرگ DNA از ابتدا سنگ بنای سنتز ژن است که شامل روش هایی مانند BioBrick™، TAR، BglBrick، Golden Gate، مونتاژ گیبسون، CPEC و Overlap PCR می باشد. با توجه به محدودیت‌های فناوری فعلی در سنتز دقیق DNA طول ژن در یک مرحله، لازم است تکنیک‌های مونتاژ in vitro و in vivo برای مونتاژ قطعات الیگونوکلئوتیدی سنتز شده در بخش‌ها به قطعات طولانی DNA ترکیب شوند.

تکنیک های مونتاژ آزمایشگاهی

آنها بر اساس اندازه قطعه و ویژگی های توالی به روش های مختلفی طبقه بندی می شوند، با یک نیاز رایج برای استفاده از آنزیم های ابزار. Overlap PCR، بر اساس روش DNA پلیمراز، کار ساده و سریعی دارد. روش‌های BioBrick و BglBrick که بر ایزواسکیزومرها متکی هستند، مونتاژ استانداردی را امکان‌پذیر می‌سازند، اگرچه روش BioBrick برای پروتئین‌های همجوشی نامناسب است. روش شبیه سازی گلدن گیت، بر اساس آنزیم های محدود کننده نوع IIS، امکان بستن بدون درز کارآمد قطعات متعدد را فراهم می کند. روش مونتاژ گیبسون، که از ترکیبی از آنزیم‌های ابزار متعدد استفاده می‌کند، بستن یکپارچه با اندازه قطعات به چند صد کیلوبایت را ممکن می‌سازد. طراحی استاندارد اجزای DNA میزان استفاده از قطعات موجود را افزایش می دهد.

تکنیک های مونتاژ در داخل بدن

هر چند در شرایط in vitro قطعات مونتاژ شده می توانند به چند صد کیلوبایت برسند، بازده اغلب ناکافی است، و نیاز به تقویت با استفاده از ارگانیسم هایی مانند اشریشیا کلی. در مونتاژ قطعات بیش از 20 کیلوبایت، اغلب از سیستم های نوترکیب در موجودات استفاده می شود، از جمله باسیلوس سوبتیلیس، مخمر، و باکتری های مهندسی شده. مخمر، به عنوان یک میزبان متداول، برای چندین سال به دلیل قابلیت نوترکیبی همولوگ کارآمد خود شناخته شده است. می توان از آن برای مونتاژ کروموزوم های مصنوعی تا چندین مگاباز (Mb) در طول استفاده کرد. علاوه بر این، ساکارومایسس سرویزیه تحمل فوق‌العاده‌ای برای طول کروموزوم از خود نشان می‌دهد که مبنایی نظری برای استفاده از مخمر برای ساخت کروموزوم‌های فوق‌طول در موجودات بالاتر فراهم می‌کند.

اپلیکیشن‌ها

Yaohai Bio-Pharma در درجه اول از دو روش مونتاژ برای سنتز ژن استفاده می کند: مونتاژ لیگاز و مونتاژ DNA پلیمراز. روش مونتاژ لیگاز قطعات الیگونوکلئوتیدی 5'-فسفریله شده با همپوشانی و هیبرید شده را با استفاده از DNA لیگاز به DNA دو رشته ای متصل می کند. روش مونتاژ پلیمراز از DNA پلیمراز برای گسترش قطعات الیگونوکلئوتیدی همپوشانی از طریق هیبریداسیون، به دست آوردن مخلوطی از طول های مختلف، و در نهایت تقویت قطعات تمام قد با موفقیت مونتاژ شده با استفاده از پرایمرها استفاده می کند. Yaohai می تواند به مشتریان کمک کند تا نیازهای خاص در سنتز ژن را برآورده کنند.

ما همچنین به طور فعال به دنبال شرکای جهانی نهادی یا فردی هستیم. ما رقابتی ترین پاداش را در صنعت ارائه می دهیم. اگر سوالی دارید، لطفا با ما تماس بگیرید: [email protected]