روش‌های اصلاح RNA گزارشگر قهرمان

هنگام انتخاب اینکه کدام روش اصلاح mRNA گزارشگر ارجح است، هیچ پاسخ قطعی وجود ندارد زیرا هر روش و ژن گزارشگر مزایا و سناریوهای قابل اجرا خود را دارد. در اینجا چند روش متداول اصلاح mRNA و ژن های گزارشگر، همراه با ویژگی ها و مناسب بودن آنها آورده شده است.

روش های اصلاح mRNA

متیلاسیون:

1. m6A: مرتبط با پایداری mRNA، پیوند، ترجمه و پردازش miRNA. چالش های تشخیص شامل انتخاب آنتی بادی و محلی سازی است.
2. 5 دقیقه درپوش Nm: پایداری، اتصال، پلی آدنیلاسیون و صادرات هسته ای را افزایش می دهد. به تشخیص خود RNA از RNA خارجی کمک می کند.
3. پسودوریدیلاسیون: کدون ها را تغییر می دهد، ثبات را افزایش می دهد و به استرس پاسخ می دهد. کاتالیز شده توسط pseudouridine synthases.

معرفی نوکلئوتیدهای غیر طبیعی:

1. در طول رونویسی با یک استراتژی اصلاح شیمیایی دوگانه معرفی شد. ثبات، کارایی و بیان پروتئین را افزایش می دهد.

ژن های گزارشگر

1. ژن پروتئین فلورسنت سبز (GFP): مزایا: تشخیص آسان، خواص فلورسانس پایدار، غیر سمی برای سلول ها، مناسب برای تصویربرداری سلول های زنده. معایب: شدت فلورسانس محدود.
2. پروتئین فلورسنت سبز تقویت شده (eGFP)مزایا: بیش از 6 برابر روشن تر از نوع وحشی GFP، که آن را به عنوان یک ژن گزارشگر برای مطالعه بیان ژن، تنظیم، تمایز سلولی و محلی سازی و انتقال پروتئین در موجودات زنده مناسب تر می کند.
3. پروتئین های فلورسنت قرمز (به عنوان مثال، mCherry)مزایا: تحریک و انتشار طول موج طولانی تر، در نتیجه پس زمینه کمتر در طول تصویربرداری درون سلولی، روشنایی فلورسانس عالی و پایداری نور، و سمیت سلولی کمتر. معایب: ممکن است به اندازه GFP در شرایط آزمایشی خاص استفاده نشود.
4. کرم شب تاب لوسیفرازمزایا: در حضور ATP، یون‌های منیزیم و اکسیژن، می‌تواند اکسیداسیون لوسیفرین را به اکسی‌لوسیفرین کاتالیز کند و بیولومینسانس منتشر کند. این برای استفاده به عنوان یک کنترل برای مطالعه کارایی ترجمه ژن های هدف در سلول های پستانداران، زنده ماندن سلولی و سنجش های تصویربرداری in vivo مناسب است.

نتیجه

هنگام انتخاب اینکه کدام روش از اصلاحات mRNA گزارشگر ارجح است، به اهداف آزمایشی خاص، پیشینه تحقیق و شرایط آزمایشی بستگی دارد. به عنوان مثال، اگر حساسیت بالا مورد نیاز است، eGFP ممکن است انتخاب بهتری باشد. اگر برای کاهش تداخل پس‌زمینه به تصویربرداری در طول موج‌های طولانی‌تر نیاز است، پروتئین‌های فلورسنت قرمز مانند mCherry ممکن است مناسب‌تر باشند. علاوه بر این، بر اساس نیازهای اصلاحی خاص mRNA (به عنوان مثال، افزایش پایداری، بهبود کارایی ترجمه)، روش اصلاح مربوطه را می توان انتخاب کرد.

Yaohai Bio-Pharma به عنوان اولین و بزرگترین CRDMO بیولوژیک میکروبی در چین بزرگ، راه حل های سفارشی یک مرحله ای یا خدمات مستقلی را ارائه می دهد که از سنتز RNA، مهندسی سویه و ساخت، توسعه فرآیند بالادستی و پایین دستی، GMP یا غیر آن را شامل می شود. - تولید مواد دارویی در سطح GMP، و خدمات پر کردن و تکمیل برای روش‌های مختلف، مانند mRNA، circRNA، پلاسمید RNA، پروتئین های نوترکیب، پپتیدها، آنزیم ها، آنتی بادی های تک دامنه و VLP ها برای مصارف انسانی و دامپزشکی.

Yaohai Bio-Pharma نیز فعالانه به دنبال شرکای سازمانی یا فردی جهانی است و رقابتی ترین غرامت را در صنعت ارائه می دهد. اگر سوالی دارید، لطفا با ما تماس بگیرید: [email protected]