Kvaliteetse plasmiidi ekstraheerimise saladuste avamine

Plasmiidi ekstraheerimine on teadlaste jaoks ülioluline. Plasmiidid on geenivektoritena üliolulised vaktsiiniuuringutes ja geeniteraapias, kus kvaliteet on oluline. Peamised kvaliteeditegurid hõlmavad superspiraalset osa ja endotoksiinide sisaldust. Määrused on erinevad: FDA ≥80%, SMPA ≥85%, NMPA ≥90%, <5% lineaarse/avatud ringikujulise DNA-ga. Kliendid eelistavad sageli ≥95% supercoiled. Endotoksiinide tasemed on: uuringud (>50 EU/µg), transfektsioon (<50 EU/µg) ja endotoksiinivabad (<0.1 EU/µg).

Superspireeritud plasmiidne DNA

Escherichia coli plasmiidid hõlmavad superspireeritud (SC), avatud ringikujulist (OC) ja lineaarset (L) DNA-d. Kõrge SC osakaal suurendab transfektsiooni efektiivsust ja ekspressiooni. Näiteks 85.45% SC plasmiidi transfektsioon on 2.5 korda kõrgem ja 93.28% SC plasmiidi HGF ekspressioon on 1.8 korda kõrgem, mis kinnitab SC DNA paremust.

Avatud ringikujuline DNA: kui kaheahelalise DNA üks ahel katkeb, muutub ülikeerdunud struktuur lahti, moodustades suurema mahuga avatud ringikujulise plasmiidi, mis migreerub elektroforeesi ajal kõige aeglasemalt ja paikneb ülaosas.

Lineaarne DNA: kui plasmiidse DNA mõlemad ahelad katkevad, moodustub lineaarne struktuur, mille maht on suhteliselt väiksem ja mis migreerub kiiremini kui avatud tsirkulaarne DNA, kuid aeglasem kui superkeerdunud DNA.

Superkeerdunud DNA: kaks heeliksit põimuvad, väänades DNA heeliksil põhinevaks superkeerdunud struktuuriks. Sellel on väikseim maht ja see rändab kõige kiiremini elektroforeesi ajal, paiknedes põhjas.

Superspiraali proportsiooni kvantitatiivne analüüs

Laborid kasutavad agaroosgeelelektroforeesi (AGE) ja Gel-Pro Analyzerit, et hinnata ülikeerdunud proportsiooni elektroforeesipiltide abil. Ühel pildil on 97.539% SC DNA-d, teisel aga 63.833% SC ja 36.167% OC DNA-d (lineaarne DNA pole nähtav).

Endotoksiini saladus plasmiidides

Endotoksiin on gramnegatiivsete bakterite rakuseina väliskihi komponent, mis vabaneb pärast bakterite surma või lüüsi ja sisaldab toksilist lipopolüsahhariidi A. Plasmiidi ekstraheerimisel siseneb endotoksiin lüüsilahusesse, mõjutades transfektsiooni efektiivsust ja käivitades mittespetsiifilised immuunvastused, mis viib valepositiivsete tulemusteni katsetes.

Endotoksiini kvantitatiivne ja kvalitatiivne analüüs

Limulus amebocyte lysate (LAL) test tuvastab endotoksiini aglutinatsiooni teel lipopolüsahhariidis (LPS) 2-keto-3-deoksüoktoonhappega (KDO). See on kvalitatiivne ja poolkvantitatiivne, mis näitab endotoksiini olemasolu koagulatsiooni või proovidega segamisel värvimuutuse kaudu.

Yaohai Bio-Pharma pakub endotoksiinivabu superspireeritud plasmiide. Yaohai sisseostmine suurendab transfektsiooni ja ekspressiooni tõhusust. Tarnitud plasmiidide SC osakaal on ≥95% (keskmiselt 85%±10%) ja endotoksiinide tase on ≤0.1, ≤0.01 või ≤0.005 EU/μg.

Otsime aktiivselt ka institutsionaalseid või individuaalseid globaalseid partnereid. Pakume valdkonna kõige konkurentsivõimelisemat tasu. Kui teil on küsimusi, võtke meiega julgelt ühendust: [email protected]