Avama plasmidi kvaliteetse ekstrakti saladused

Plasmidide ekstraktioon on uurijate jaoks oluline. Kui geenivektorid, on plasmidid elutähtsad vaktsiinide uurimises ja geenieteraapias, kus kvaliteet loeb. Peamised kvaliteedifaktorid hõlmavad ülemkoolitunud osa ja endotooside sisu. Regulatsioonid varimeerivad: FDA ≥80%, SMPA ≥85%, NMPA ≥90%, <5% lineaarset/avatud ringdna. Kliendid eelistavad sageli ≥95% ülemkoolitud DNA-d. Endotoositasemed on järgmised: teadusuuringuteks (>50 EU/µg), transfektsiooniks (<50 EU/µg) ja endotoosivabaks (<0.1 EU/µg).

Ülemkoolitud Plasmid DNA

Escherichia coli plasmidid sisaldavad ülemkoolitud (SC), avatud ringdna-d (OC) ja lineaarsed (L) DNA-d. Suur SC osa suurendab transfektsiooni tõhusust ja väljendust. Näiteks 85.45% SC-plasmidi transfektsioon on 2,5 korda kõrgem ning 93.28% SC-plasmidi HGF väljendus on 1,8 korda kõrgem, mis kinnitab SC DNA-superioriteeti.

Avatud-ringne DNA: Kui üks kahest dubberadna lõigustest müratab, muutub superkoolitud struktuur laiaks, moodustades avatud-ringse plasmidi, mis on suurema mahtuga ja migrineerib elektroforeesises aeglasemalt, asetades end kõrgeimale positsioonile.

Ridade DNA: Kui müratab nii plasmididna esinemiseks vajalikud mõlemad lõigused, moodustub ridade struktuur, mis on suurem kui superkoolitud DNA, kuid väiksem kui avatud-ringne DNA. See migrineerib kiiremini kui avatud-ringne DNA, kuid aeglasemalt kui superkoolitud DNA, asetades end teiseks positsiooniks.

Superkoolitud DNA: Kaks helixi kinnituvad kokku ning moodustavad superkoolitud struktuuri DNA-helixi põhjal. Sellel on väikseim maht ja see migrineerib kiiremini elektroforeesises, asetades end alumisele positsioonile.

Superkoolitud proportsiooni kvantitiivne analüüs

Teaduslaboratooriumid kasutavad agarosegelielectroforeesist (AGE) ja Gel-Pro Analyzerit superkoolitud proportsiooni hindamiseks elektroforeesi piltidel. Üks pilte näitab 97,539% SC DNA-d, samas kui teine näitab 63,833% SC DNA-d ja 36,167% OC DNA-d (ridade DNA ei ole näha).

Endotoksi salapäev plasmiidides

Endotoxin on Gram-negatiivsete baktseriakute rakuhinge välise kihi komponent, mis vabastub baktseria surmamisel või liisimisel ja sisaldab toksilist lipiidipolüsaakaridiit A. Plasmiidi ekstraktimise ajal jõuab endotoxin liisimislahendisse, mida võib transfeerimise efektiivsusele mõjutada ja mis võib põhjustada mittespesiifiliste immuunivastuseid, viies eksperimentides valepositiivsetele tulemustele.

Kvantitiivne ja kvalitiivne analüüs endotoxini kohta

Limulus amebotsüllide (LAL) test tuvastab endotoksiini agglutinatsiooniga 2-keto-3-deoksioktoonohentsa (KDO) lipiidipolüsaakaridiidist (LPS). See on kvalitiivne ja poolkuantitiivne, näitades endotoksiini olemasolu koagulatsiooni või värvi muutmise abil, kui see segatakse proovidega.

Yaohai Bio-Pharma pakub endotoksiinivabase superkoolnetud plasmiide. Välismaaliste teenuste kasutamine Yaohail võib suurendada transfeerimise ja ekspresseerimise efektiivsust. Toimeandetavad plasmiidid sisaldavad ≥95% SK osa (keskmine 85%±10%) ja endotoksiinitasemeid ≤0,1, ≤0,01 või ≤0,005 EU/μg.

Oleme samuti aktiivselt otsimas institutsioonilisi või isiklike globaalseid partnereid. Pakume tööstuses kõige konkurentsivõimsamat kompensatsiooni. Kui teil on mingeid küsimusi, palun ei esitage kontaktimist: [email protected]