Rekombinantse valgu tootmine: konstrueeritud E. coli tüved

Escherichia coli (E. coli) on mänginud olulist rolli rekombinantsete valkude tootmisel biofarmatseutilises tööstuses, olles esimene ekspressioonivektor bioloogiliste ravimite tootmisel. E. coli'l on muude eeliste hulgas kiire kasv, mugav geneetiline manipuleerimine ja rekombinantsete valkude kiire süntees. Ulatuslikud modifikatsioonid on muutnud E. coli valguekspressiooniks optimaalseks valikuks, mis on viinud erinevate konstrueeritud E. coli tüvede väljatöötamiseni.

Yaohai Bio-Pharma on spetsialiseerunud E. coli ekspressioonisüsteeme kasutavate biofarmatseutiliste preparaatide fermentatsiooni, puhastamise, formuleerimisprotsesside arendamise ja tootmise ühekordse allhanke teenuste pakkumisele. Seoses Yaohai laialdase kogemusega tegime kokkuvõtte, et rekombinantse valgu tootmiseks kasutatakse nelja levinud E. coli tüve ja nende omadusi.

BL 21 tüvi

E. coli B liinist tuletatud BL21 tüvel puuduvad Lon proteaas ja välismembraani proteaas OmpT. Lon-proteaas lagundab peamiselt eksogeenseid valke, samas kui OmpT lagundab peamiselt rakuväliseid maatriksivalke. Nende kahe võtmeproteaasi puudumine võib tõhusalt ära hoida rekombinantsete valkude lagunemist.

Origami tüvi

Origami tüvel, E. coli K-12 derivaadil, on mutatsioonid tioredoksiini reduktaasis ja glutatioonreduktaasis, mis hõlbustavad disulfiidsidemeid sisaldavate õigesti volditud valkude moodustumist ja parandavad valkude lahustuvust. Origami tüvi, sealhulgas Origami, Origami 2 ja Origami B, sobivad disulfiidsidemeid sisaldavate aktiivsete valkude ekspressiooniks.

SHuffle tüvi

SHuffle'i tüvi ekspresseerib tsütoplasmas konstitutiivselt disulfiidsideme isomeraasi DsbC, soodustades õigete disulfiidsidemete moodustumist oksüdeeritud valkudes. See toimib ka molekulaarse chaperonina valkude voltimisel, aidates kaasa õige konformatsiooni kujunemisele.

Rosetta tüvi

Rosetta tüvi täiendab E. coli haruldastele koodonitele vastavate tRNA-dega, eesmärgiga parandada eksogeensete geenide, eriti eukarüootsete geenide ekspressioonitaset prokarüootsetes süsteemides. BL21-st tuletatud ja klooramfenikooliresistentset pRARE plasmiidi kandev see täiendab kuut tRNA-d, mis vastavad haruldastele koodonitele (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC ja GGA), mis algselt E. coli-s puudusid, tagades "universaalsema" valguekspressiooni.

Järeldus

Rekombinantsete valkude eduka tootmise kolm peamist tegurit on peremeesorganism, vektor ja kultiveerimistingimused. Tuginedes arusaamisele rekombinantse valgu füüsikalis-keemilistest omadustest, iga tüve ainulaadsetest eelistest ja eksperimendi spetsiifilistest vajadustest, tuleks valida sobivaim peremeesorganism. Lisaks tuleks valgu ekspressiooni suurendamiseks optimeerida selliseid tegureid nagu plasmiidvektorid, temperatuur ja indutseerijad.

Yaohai Bio-Pharma otsib aktiivselt ka institutsionaalseid või individuaalseid ülemaailmseid partnereid ja pakub sektoris kõige konkurentsivõimelisemat tasu. Kui teil on küsimusi, võtke meiega julgelt ühendust: [email protected]