Innovatiivsed kokkupanekutehnoloogiad suurte skaalate geneetilise sünteesi jaoks

Tehnoloogia, mis kasutatakse nullist suurte DNA-plokkide sünteesimiseks, on gene sünteesi peamne alus, hõlmates meetodeid nagu BioBrick™, TAR, BglBrick, Golden Gate, Gibson süntees, CPEC ja Overlap PCR. Praeguse tehnoloogia piirangute tõttu DNA täpsel sünteesimisel ühe sammu jooksul gene pikkusega on vaja kombinada in vitro ja in vivo kokkupanekutehnikaid, et segmentides süntetsetud oliigonukleotiidplokke kokku panna pikemaks DNA-plokkideks.

In vitro kokkupanekutehnika

Need on klassifitseeritud erinevate meetodite alusel pargi suuruse ja jadaomaduste järgi, ühises nõu kasutada tööriistade enzyyme. Overlap PCR, mis põhineb DNA polümeraasi meetodil, on lihtne ja kiire operatsioonis. BioBrick ja BglBrick meetodid, mis sõltuvad isoschizoomeridest, võimaldavad standardsete kokkupanemist, kuigi BioBrick meetod ei ole sobilik fuusiproteiinide jaoks. Golden Gate kloonimismeetod, mis põhineb tüübi IIS piirivates enzyymides, võimaldab mitmete pargade tõhusat seadmatut ligatsiooni. Gibsoni kokkupanemismeetod, mis kasutab mitmeid tööriistade enzyyme kombinatsiooniga, võimaldab seadmatut ligatsiooni pargasuurustega, mis saavutavad mitmeid sadaid kb. DNA komponendite standardiseeritud disain suurendab olemasolevate pargade kasutamisefektiivsust.

In vivo kokkupanemismeetodid

Kuigi in vitro kokkupandud pargid võivad jõuda mitmeid sadaid kb suuruseks, kuid tootlus on sageli ebapiisav, mis nõuab organismaatide, nagu Escherichia coli. Pargide kokkupanemisel, mis ületavad 20 kb, kasutatakse sageli organismide rekombinantseid süsteeme, sealhulgas Bacillus subtilis'i, kümmitust ja geneeritud bakteeriume. Kümmitus, kui tavaline lugu, on olnud aastaid tunnustatud oma efektiivse homoloogilise rekombinatsiooni võime poolest. Seda saab kasutada kunstlike kromosoomide kokkupanemiseks pikkusega mitmeid megabaase (Mb). Lisaks näitab Saccharomyces cerevisiae erilist sstimevõimet kromosoomi pikkuse suhtes, mis annab teoreetilise aluse kõrgemate organismide ultra-pikkade kromosoomide loomiseks käyttööse.

Rakendused

Yaohai Bio-Pharma kasutab geneetilise sünteesi jaoks peamiselt kahte montaažmeetodit: liigase montaaži ja DNA polümeraasi montaaži. Liigase montaaži meetod ühendab üleklapuvaid ja hübriidseks muutunud 5'-fosforülikate oliгонukleotiidi fragmentide dubblaadseks DNA-liikmeks DNA liigase abil. Polümeraasi montaaži meetod kasutab DNA polümeraasi, et pikendada üleklapuvaid oliгонukleotiidi fragmente hübriidkujunduse kaudu, saades erinevate pikkuste segu ning lõpuks amplifeerides edukalt kokku monteeritud täieliku pikkuse fragmendid prümidite abil. Yaohai võib aidata klientidel rahuldada spetsiifilisi nõudeid geneetilise sünteesi osas.

Oleme samuti aktiivselt otsimas institutsioonilisi või isiklike globaalseid partnereid. Pakume tööstuses kõige konkurentsivõimsamat kompensatsiooni. Kui teil on mingeid küsimusi, palun ei esitage kontaktimist: [email protected]