Integridad del ARNm
La importancia del análisis de integridad del ARNm
Los ARNm son reconocidos por su inestabilidad inherente y son susceptibles a la fragmentación en presencia de factores externos, particularmente durante los procesos de transcripción in vitro (IVT) y purificación, donde las nucleasas ubicuas representan un desafío. La evaluación de la integridad del ARNm es crucial en el desarrollo posterior de medicamentos basados en ARNm, garantizando tanto la seguridad como la disponibilidad del producto.
Yaohai-BioPharma brinda servicios integrales de pruebas de integridad del ARNm, empleando métodos como electroforesis en gel de agarosa (AGE), electroforesis capilar (CEG) y cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC), cumpliendo con rigurosos estándares de calidad tanto para investigación como para ensayos clínicos.
Requisitos reglamentarios para la integridad del ARNm
Según las consideraciones regulatorias de la OMS, “la integridad de la estructura del ARNm se considera un atributo de calidad crítico para la liberación del ARNm. Por lo tanto, es necesario controlar la integridad del ARNm, el porcentaje de ARNm intacto, el porcentaje de fragmentos de ARNm, etc.
Método analítico
ECONOMÉTRICOS |
Métodos |
integridad del ARNm |
AGE, agarosagelectroforesis |
CGE,Electroforesis capilar |
CGE-LIF, Electroforesis en gel capilar con detección de fluorescencia inducida por luz |
Integridad del ARNm mediante electroforesis en gel de agarosa
La electroforesis en gel de agarosa es una técnica ampliamente utilizada para evaluar la integridad del ARN total. Esto implica ejecutar la muestra de ARN en un gel de agarosa desnaturalizante, teñido con bromuro de etidio o SYBR Green. El gel desnaturalizante, compuesto de agarosa, facilita la separación del ARN en función del tamaño cuando se aplica una corriente eléctrica. A medida que el ARN cargado negativamente migra hacia el extremo positivo del gel, los fragmentos más pequeños se mueven más rápidamente, lo que da como resultado una clasificación de las moléculas de ARN basada en el tamaño.
Integridad del ARNm mediante electroforesis en gel capilar
La electroforesis en gel capilar (CGE) constituye un método analítico de alta resolución fundamental para medir la integridad de las moléculas de ARN en función de su longitud. Esta evaluación tiene importancia para el aseguramiento de la calidad, la comprensión de la potencia y la optimización de los procesos de fabricación. De manera similar a la electroforesis en gel de agarosa, la CGE utiliza una corriente eléctrica para segregar fragmentos de ARN según su carga y tamaño. En CGE, un capilar se llena con una matriz de gel de separación con un tinte fluorescente. El movimiento del ARN a lo largo del capilar depende de su tamaño y la detección se logra mediante detectores ultravioleta (UV) o de fluorescencia inducida por luz (LIF).
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