Identificación y cantidad de la composición de lípidos de LNP
La importancia del análisis de la composición de lípidos de LNP
Las nanopartículas lipídicas (LNP), que comprenden lípidos catiónicos, colesterol, fosfolípidos y lípidos conjugados con PEG, sirven como sistemas de administración destacados para productos farmacéuticos de ARNm. La estabilidad y la fluidez de la bicapa de las LNP dependen de las propiedades y el contenido de los diversos lípidos utilizados en el sistema de formulación. La composición de los lípidos es muy importante para determinar qué tan bien las LNP administran los medicamentos.
Yaohai-BioPharma proporciona soluciones para identificar y cuantificar la composición lipídica de ARNm-LNP mediante el método de cromatografía líquida de alto rendimiento con detección de aerosol cargado (HPLC-CAD).
Requisitos reglamentarios para la composición de lípidos
Según las consideraciones regulatorias de la OMS, “se debe describir la composición final de la vacuna, incluidos los lípidos, junto con la cantidad de los componentes en cada presentación”.
Método analítico
Analisis | Métodos |
Composición de lípidos | HPLC combinado con detector de aerosoles cargados por corona (CAD) |
Procedimiento
Paso 1. Preparación de muestras de lípidos
La elección del diluyente es de suma importancia para el análisis de componentes lipídicos en productos farmacéuticos de ARNm-LNP. El diluyente debe disolver eficazmente cada componente lipídico e interrumpir cualquier interacción entre los lípidos y el ARNm encapsulado. Los diluyentes potenciales incluyen etanol, etanol/dimetilsulfóxido (DMSO), etanol/formamida, etanol/acetato de trietilamina y otros.
Paso 2. HPLC-CAD
La cromatografía líquida de fase inversa (RP-HPLC) combinada con un detector de aerosol cargado (CAD) se ha incorporado a las pruebas de composición de lípidos de LNP. Dado que los lípidos carecen de cromóforos y no absorben la radiación ultravioleta (UV) sin derivatización, la volatilización suele ser un desafío. La CAD, al ser más sensible, puede discernir un espectro más amplio de contenido de lípidos. Anteriormente, se formuló y aplicó un método de cromatografía líquida de rendimiento ultraalto (UHPLC) junto con un detector de aerosol cargado (CAD) en el análisis de lípidos para pequeños estudios de LNP de ARN de interferencia (ARNip).
Paso 3. Análisis de datos
La cantidad de cada lípido dentro de la muestra implicó cálculos derivados de la curva estándar multiplicada por el factor de dilución. Este proceso produjo el contenido de lípidos para cada componente dentro de la muestra de ARNm-LNP.
Caso de análisis de composición lipídica de LNP con HPLC-CAD
Basado en HPLC-CAD, Yaohai-BioPharma ha desarrollado un método robusto para el análisis de componentes lipídicos de mRNA-LNP. Este método fue validado para ser lineal, repetible, preciso, exacto y específico para formulaciones de LNP, lo que podría respaldar el desarrollo de procesos, el desarrollo de formulaciones, las pruebas de estabilidad y la liberación de ARNm-LNP.
Perfil cromatográfico de 4 lípidos mediante el método HPLC-CAD de Yaohai-BioPharma.
La linealidad del método HPLC-CAD de Yaohai-BioPharma (R2＞0.99)
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