Merhaba. Bilim insanlarının bir RNA'yı nasıl klonlayabildiğini hiç merak ettiniz mi? RNA, hücrelerimizde bulduğumuz ve protein üretmek için bir sürü şey yapan özel bir moleküldür ve proteinler vücudumuzun doğru şeyleri yapabilmesi için oradadır. Bu bölümde, araştırmacılar tarafından kullanılan çok daha ilginç bir protokolün üzerinden geçeceğiz: İn vitro transkript. Ve bunun tek anlamı, bilim insanlarının RNA alıp bir test tüpünde (laboratuvarların kullandığı küçük kavanoz) çok miktarda üretmesidir, bu yüzden burada her adımı ele alalım.
Önceki yazımı bitirdikten sonra, sonuncusunun biraz kuru gelip ıslak laboratuvarda eğlenceye katılma yazıları olabileceğini fark ettim; bu yüzden, artık eğlence (sic RNA yapımı) treninde olduğunuza göre, EF'niz için hangi reaktiflere ve c'ye ihtiyacınız olacak? Bunu başarmak için, Yaohai'nin ürününe benzer, enzimler adı verilen özel proteinlere ihtiyacımız olacak Rekombinant Midkine Üretimi. Kimyasal reaksiyonları katalize eder, bu enzimler parçalanmaya yardımcı olur. Yani şimdi sadece DNA parçamıza ihtiyacımız var. Bu işlev, RNA'mız için kopyalamak üzere şablon olarak kullandığımız DNA'dır. RNA'daki ek düzenleyici diziler, yani nükleotidler de gereklidir. Bu nükleotidler, RNA'yı yapmak için bir araya getirilmesi gereken küçük yapı taşları gibidir. Ayrıca tat değerlendirmesini diğerlerine karıştırmak için küçük çaplı kısa tüpler kullanıyoruz. Son olarak, reaksiyonlarımızın doğru sıcaklıkta olduğundan emin olan bir makineye (termosikler) ihtiyacımız var. Ek olarak, belirli deneyler için birkaç araç ve ürüne ihtiyacımız olabilir.
Yani burada işler farklılaşıyor, bir RNA ipliğimiz var ve şimdi bunun daha fazla kopyasına sahip olmak istiyoruz, ayrıca Konjuge VLP Aşıları İmalatı Yaohai tarafından geliştirilmiştir. Başka bir enzimi kullanmanın yolu; T7 RNA polimerazı. Örneğin, bu benzersiz enzim RNA içindeki belirli alanları tanır. devam eden süreçte çok daha fazla RNA kopyası yapmak için bir sıçrama konisi. Bu noktada, bir transkript kütlesi oluşturulana veya durmasını söyleyene kadar T7 RNA polimerazı tarafından RNA ipliğine daha fazlası eklenecektir.
RNA'yı mümkün olduğunca izole ettikten sonra, temizlemenin ve RNA'yı gelecekte kullanmak üzere saklamanın nasıl yapılacağını görmek için aşağı doğru kaydırın. Rhoades: Bu yöntemlerden bazıları RNA'yı izole etme açısından biraz daha uç noktalardadır — bunu her zaman kullanmazsınız, ancak bazen belirli deney türleri için gereklidir. RNA'mız herhangi bir kirleticiden arındırıldığında dondurularak saklanabilir. Bu şekilde güvenlidir ve daha sonra çeşitli deneylerde kullanabiliriz.
Başlangıç materyalinin kalitesi: DNA şablonunuzun temiz olduğundan ve tamamen yanmadığından emin olun. Başarılı bir deney şansınızı en üst düzeye çıkarmak için taze olarak yeniden oluşturulmuş nükleotidler ve yeni çözülmüş enzimlerle de destekleyebilirsiniz.
İnce ayar koşulları Tüm enzimler ve nükleotidleri vücudunuzun içinde belirli bir sıcaklık ve pH'ta daha iyi çalışır, ayrıca Yaohai'nin Kırmızı Floresan mRNAŞimdi benzersiz kurulumunuz için anahtarın olduğu yere gelene kadar koşullar arasındaki nüansı biraz ayarlayın.
Ters transkriptaz, bir RNA molekülünden bir DNA kopyası yaptığı için alışılmadık bir enzimdir. RNA üretmek için in vitro transkript yöntemimizde girdi olarak hem DNas hem de bir DNA şablonu (cDNA) kullandık. Ancak, çoğu deneyde bilim insanları DNA'yı RNA'ya transkribe etmek ister. Ters transkripsiyon, adını aldığı yerdir mRNA poli-A Dağıtım Testi Yaohai tarafından yapılmıştır. Hücrelerin içindeki RNA moleküllerini incelemekten, daha ileri deneyler için tamamlayıcı DNA zincirleri üretmeye kadar bilimde paha biçilmez bir araçtır.
RNA'nın en yaygın kullanılan moleküler araçlardan biri olduğu ve Yaohai'nin ürünüyle birlikte gerçek yaşam deneyleri E. coli'de VLP Aşı Üretimi. Kantitatif analizler: Bu testler, bir örnekte bulunan herhangi bir spesifik molekülün miktarını ortaya çıkarabilir. Örneğin, bilim insanları bir hücre içinde bulunan hedeflenen bir genden türetilen RNA kopyalarının in vitro transkript preparatını sentezleyebilir. Tanı daha sonra, RNA aradıkları durumda bu kopyaları analiz edebilir. Tanı, bir örnekteki bu kopyaları çoğaltmak için bir polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) çalıştırabilir. Bu, bilim insanlarının genlerin hücrelerde nasıl ifade edildiğini görmelerini mümkün kılar ve hatta bakteriyel veya viral enfeksiyon varlığı gibi bazı son derece yüksek verimli analizlere ve genetik bozuklukları teşhis etmeye olanak tanır.
in vitro Transcript Protocol, mikrobiyal biyolojik CDMO'da liderdir. Odak noktamız, insan, veterinerlik ve evcil hayvan sağlığı yönetimi için uygun olan mikrobiyal üretimli aşılar ve terapötikler olmuştur. Mikrobiyal suşların ve hücre bankacılığının geliştirilmesinden başlayarak, işlem ve yöntem geliştirmeye, yenilikçi çözümlerin başarılı bir şekilde teslim edilmesini sağlayan ticari ve klinik üretime kadar tüm prosedürü kapsayan en son teknoloji RD platformlarına ve üretim teknolojisine sahibiz. Zamanla, mikrobiyal tabanlı biyolojik işleme konusunda geniş bir bilgi birikimi edindik. 200'den fazla proje başarıyla tamamlandı ve müşterilerimizin ABD FDA ve AB EMA gibi düzenlemelere uymalarına yardımcı oluyoruz. Ayrıca Avustralya TGA ve Çin NMPA'da gezinmelerine yardımcı oluyoruz. Profesyonel uzmanlığımız ve kapsamlı deneyimimiz, pazar taleplerine hızlı bir şekilde yanıt vermemizi ve özel CDMO hizmetleri sunmamızı sağlar.
Yaohai Bio-Pharma, in vitro Transkript Protokolü'nden oluşturulan biyolojiklerin üretiminde deneyime sahiptir. Hiçbir risk olmadığından emin olarak özelleştirilmiş RD ve üretim çözümleri sunuyoruz. Alt birim aşılar rekombinant, peptitler hormonlar, sitokinler, büyüme faktörleri, tek alanlı antikorlar enzimler, plazmid DNA MRNA ve daha fazlası gibi çeşitli yöntemlerde yer aldık. Maya hücre dışı ve hücre içi salgısı (15 g/L'ye kadar verim) ve bakteri hücre içi çözünür ve inklüzyon gövdesi (10 g/L'ye kadar verim) dahil olmak üzere birçok mikroorganizma konusunda uzmanız. Ayrıca bakteri aşıları oluşturmak için bir BSL-2 fermantasyon platformu oluşturduk. Süreçleri iyileştirmeye, ürün verimlerini artırmaya ve üretim maliyetlerini düşürmeye odaklanıyoruz. Güçlü bir teknoloji ekibi kullanarak, ürününüzü daha hızlı pazara sunacak hızlı ve güvenilir proje teslimatını sağlayabiliriz.
Biyolojik ürünlerin ilk 10 üreticisinden biri olan Yaohai Bio-Pharma, mikrobiyal fermantasyon konusunda uzmanlaşmıştır. Sağlam Ar-Ge yetenekleri ve gelişmiş ekipmanlara sahip modern bir tesis inşa ettik. Mikrobiyal fermantasyon ve saflaştırma için GMP gerekliliklerine uygun beş ilaç maddesi üretim hattımız var. Ayrıca kartuşlar, flakonlar ve önceden doldurulmuş şırıngalar için iki otomatik doldurma-bitirme hattımız var. Kullanıma sunulan fermantasyon ölçekleri in vitro Transkript Protokolünden 2000L'ye kadar değişmektedir. Bir flakonun doldurulması için özellikler 1 ml'den 25 ml'ye kadar değişmektedir. Önceden doldurulmuş şırınga veya kartuş doldurma özellikleri yaklaşık 1-3 ml arasında değişmektedir. cGMP uyumlu üretim tesisimiz, klinik numunelerin yanı sıra ticari ürünlerin de sürekli tedarikini sağlar. Tesisimiz, dünyaya gönderilen büyük moleküller üretmektedir.
Yaohai BioPharma, in vitro Transkript Protokolü ve düzenleyici işleri de içeren En İyi 10 Mikrobiyal CDMO'dur. Güncel GMP standartlarının yanı sıra küresel düzenlemelerle uyumlu bir kalite yönetim sistemimiz var. Düzenleyici uzmanlardan oluşan ekibimiz, biyolojik lansmanları hızlandırmak için küresel düzenleyici çerçevelerde uzmandır. İzlenebilir üretim süreçleri kaliteli ürünler sağlamanın yanı sıra ABD FDA ve AB EMA kurallarına da uyuyoruz. Avustralya TGA ve Çin NMPA da memnun. Yaohai BioPharma, GMP kalite sistemimiz ve üretim tesisimiz için Avrupa Birliği'nin Nitelikli Kişisi (QP) tarafından yapılan yerinde denetimi başarıyla geçti. Ayrıca, ISO9001 Kalite Yönetim Sistemi, ISO14001 Çevre Yönetim Sistemi ve ISO45001 İş Sağlığı ve Güvenliği Yönetim Sistemi'nin ilk sertifikasyon denetimlerini geçtik.