5'-uç kapatma, mRNA'nın önemli bir modifikasyonudur. Başlık yapılarına sahip mRNA'lar, özellikle Cap1 yapıları, mRNA'ların in vivo olarak doğuştan gelen bağışıklık tepkilerinden kaçmasını kolaylaştırır ve bu da etkili protein translasyonuyla sonuçlanır.
Enzimatik kapatma (iki aşamalı yöntem), ökaryotik organizmalardaki kapatma işlemine benzer şekilde, mRNA kapatmanın geleneksel yöntemidir. Bir dizi enzimin etkisi altında, 7-metilguanin (m7G), mRNA'nın 5' ucuna 5'-5' trifosfat bağı yoluyla bağlanır ve başlık yapısı Cap 1'i (m7GpppN) oluşturmak için metilasyon modifikasyonuna uğrar.
Doğal başlık yapısı oluşumunun şeması
Enzimatik kapatma reaksiyonu akışı aşağıdaki gibidir:
Doğrusallaştırılmış plazmid DNA, T7 polimerazın varlığında in vitro transkripsiyon (IVT) için bir şablon olarak kullanılır ve ineklerdeki çiçek hastalığı kapatma enzimi ve 5'-O kullanılarak tek adımlı bir saflaştırmanın ardından 2' uç başlıklı yapıya sahip mRNA oluşturulur. -metiltransferaz.
Hizmet Detayları
İsteğe Bağlı Hizmet | Servis Detayları | Teslimat Süresi (Gün) |
mRNA enzimatik kapatma | Enzimatik kapatma reaksiyonu | 1 |
Reaksiyon optimizasyonunun sınırlanması - isteğe bağlı | Reaksiyon bileşeni tasarımı ve optimizasyonu | 3~7 |
Özelliklerimiz
- Kapatma reaksiyonu bileşeninin tasarımı ve optimizasyonu
Kapatma reaksiyonu bileşeni optimize edilmiştir ve mRNA transkriptinin üretimi büyük ölçüde arttırılmıştır.
- İn vitro ifade doğrulaması
Başlıklı mRNA, 293T hücrelerine transfekte edilir ve hedef proteinin ekspresyonu tespit edilebilir.
RNaseson deney ortamının ve sarf malzemelerinin sıkı kontrolü sayesinde mRNA bozulması etkili bir şekilde önlenir.
Örnek olay
Yaohai Bio-Pharma'nın mRNA platformu mükemmel bir kapatma reaksiyonu süreci oluşturmuştur.
Enzimatik kapatma ile hazırlanan bir mRNA ön ürünü olan eGFP mRNA için, 293T hücrelerinin 24 saat boyunca transfekte edilmesinden sonra yüksek düzeyde bir eGFP floresans sinyali (yeşil floresans) gözlemlenebilir; bu, Western Blot (WB) tarafından tespit edilir; hedef proteinle güçlendirilmiş yeşil floresan protein (eGFP), in vitro verimli bir şekilde eksprese edilebilir.
293T Hücresinde Enzimatik Başlıklı eGFP mRNA'nın İfadesi
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
YOK HAYIR
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
