İki aşamalı enzimatik kapatmayla karşılaştırıldığında, tek adımlı ortak transkripsiyonel kapatma yöntemi, işlem akışını önemli ölçüde azaltabilir. Yöntem sonuç odaklıdır ve in vitro transkripsiyon (IVT) reaksiyonuna başlık analoglarının eklenmesini içerir. Cap analogları, transkripsiyonun başlangıcında eklenebilir ve transkripsiyonun tamamlanmasının ardından başlık yapısına sahip mRNA elde edilebilir. Mevcut üçüncü nesil kapak analogları, ters kapatmayı önleyebilir ve doğrudan Cap 1 yapısını transkripsiyon ürününe ekleyebilir.
MRNA'nın in vivo immünojenisite ve translasyon verimliliği ile ilgili hususlar için, IVT işlemi genellikle belirli türde değiştirilmiş NTP'leri benimser ve yaygın olarak değiştirilmiş nükleotidler psödouridin (Ψ), N1-metil-psödouri-din (N1Ψ) ve 5-metilsitozindir (5mC) .
Şekil: mRNA Ortak Transkripsiyonel ve Kapatma Reaksiyonunun Şeması
Servis Detayları
Hizmet | Servis Detayları | Teslimat Süresi (İş Günü) |
Birlikte transkripsiyonel sınırlama | İn vitro transkripsiyonel yanıt (Clean Cap analogu) | 1-2 |
| Nükleotid modifikasyonları (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| DNA şablonunun çıkarılması (DNaz I) |
IVT durum optimizasyonu - isteğe bağlı | Reaksiyon bileşeni tasarımı ve optimizasyonu | 3-7 |
Özelliklerimiz
- Çeşitlendirilmiş Nükleotid Modifikasyon Stratejileri
Çoklu isteğe bağlı nükleotid modifikasyon stratejileri, protein ekspresyonunu iyileştirebilir.
- Optimize Edilmiş Reaksiyon Sistemi
Yüksek bir transkripsiyon oranı ve yüksek kapatma verimliliği elde edin.
- Kararlı Kapak Kapatma Süreci
%95'in üzerinde bir sınırlama oranına ulaşın.
Deney ortamında ve sarf malzemelerinde RNaz'ı sıkı bir şekilde kontrol ederek mRNA bozulmasını etkili bir şekilde önleyin.
Örnek olay
Yaohai Bio-Pharma, ters kapatmayı önlerken doğrudan Cap1 yapısını eklemek için temiz kapak analoglarını kullanarak olgun bir ortak transkripsiyonlu kapatma işlemi platformu oluşturdu. Standartlaştırılmış numune ön işlemi ve kılcal elektroforez (CE) tespitinden sonra, geliştirilmiş yeşil floresan protein (eGFP) mRNA'nın kapatma oranı %95'in üzerine çıkabilir.
eGFP mRNA verimliliği %95'ten fazla
Birlikte transkripsiyonel kapatma ile hazırlanan eGFP mRNA ve mCherry mRNA, sırasıyla 293T hücrelerine transfekte edilir ve 48 saat sonra güçlü bir floresan sinyali gözlemlenir; bu, mRNA'nın 293T hücrelerinde verimli bir şekilde eksprese edildiğini gösterir.
293T Hücresinde eGFP mRNA ve mCherry mRNA'nın ifadesi
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
YOK HAYIR
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
