MRNA'nın seri üretimi açısından in vitro transkripsiyon (IVT) daha verimli ve olgun bir yöntemdir. IVT reaksiyonu, şablon olarak T7 promotörünü içeren doğrusallaştırılmış plazmid DNA'yı benimser ve mRNA, T7 RNA polimerazın varlığında substratlar olarak nükleosid trifosfatlar (NTP'ler) ile sentezlenir.
Nükleotid modifikasyonu, değiştirilmemiş mRNA moleküllerinin hücre içi RNA sensörleri tarafından doğal bağışıklığı aktive etmek için tanındığı mRNA'nın araştırılmasında bir atılımdır. MRNA'nın in vivo immünojenisite ve translasyon verimliliği ile ilgili değerlendirmeler için, IVT işlemi genellikle belirli türde değiştirilmiş NTP'ler kullanır ve yaygın olarak değiştirilmiş nükleotidler psödouridin (Ψ), N1-metil-psödouridin (N1Ψ) ve 5-metilsitozindir (5mC).
mRNA'nın İn Vitro Transkripsiyon Süreci
İn vitro transkripsiyon (IVT) reaksiyon diyagramı
Hizmet Detayları
İsteğe Bağlı Hizmet | Servis Detayları | Teslimat Süresi (İş Günü) |
İn vitro transkripsiyon (IVT) | IVT, İn vitro transkripsiyon | 1 |
| Nükleotid modifikasyonları (Ψ/N1Ψ/5mC, vb.) |
| DNA şablonunun çıkarılması (DNaz I) |
IVT durum optimizasyonu - isteğe bağlı | IVT reaksiyon bileşenleri tasarımı ve optimizasyonu | 2-5 |
Özelliklerimiz
- Çeşitlendirilmiş Nükleotid Modifikasyon Stratejileri
İn vivo mRNA stabilitesini ve protein ekspresyonunu iyileştirin.
- Titiz Test Tasarımı ve Optimizasyonu
10kb'ye kadar mRNA fragmanı hazırlığı elde edilebilir.
IVT reaksiyon koşulları optimize edilerek transkripsiyon oranı 1:200'e kadar çıkar.
RNaz'ın deneysel bir ortam ve sarf malzemeleri aracılığıyla sıkı kontrolü, mRNA bozulmasını etkili bir şekilde önleyebilir.
vaka Çalışması
Mevcut IVT reaksiyon sistemi, keyfi uzunluktaki mRNA'lar için değil, yaklaşık 100 nt uzunluğa sahip sentetik sistemler için kabaca optimize edilmiştir. MRNA dizisi ne kadar uzun olursa, kopyalanması o kadar zor olur ve bozulmaya o kadar yatkın olur.
Yaklaşık 10 kb uzunluğa sahip özelleştirilmiş mRNA dizileri hazırlamak için Yaohai Bio-Pharma, 1:135 yüksek transkripsiyon oranına sahip yüksek kaliteli örnekleri başarıyla hazırladı ve 135 μg doğrusallaştırılmış plazmitten sonra 1 μg başlangıçta saflaştırılmış mRNA ürünü elde etti. titiz bir deney tasarımı, reaksiyon koşullarının sürekli optimizasyonu ve RNaz'ın sıkı kontrolü yoluyla in vitro olarak kopyalandı.
mRNA Tanımlaması (Agaroz Jel Elektroforezi)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
YOK HAYIR
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
