In vitro transkripsiyon (IVT) mRNA'nin hazırlanma sürecinde, T7 RNA polimerazının yardımıyla IVT için transkripsiyon şablonu olarak doğrusallaştırılmış plazmid DNA gereklidir. Yüksek kaliteli plazmid DNA, in vitro transkripsiyon için kritik öneme sahiptir.
Olgunlaşmış plazmid hazırlama hizmeti platformuna dayanarak, Yaohai Bio-Pharma yüksek safte ve standartta doğrusallaştırılmış plazmid DNA hazırlama hizmeti sunabilir ve verimli IVT transkripsiyonunu sağlayabilir.
Süreç | İsteğe Bağlı Hizmet | Hizmet Ayrıntıları | Teslimat Süresi (iş günü) |
Dairesel Plazmid Hazırlama | Gen sentezi | Gen Sentezi (Üçüncü taraf) | 7-10 |
Plazmid Yükseltme | Plazmid Yükseltme | 2 | |
Plazmid Çıkartma | |||
Doğrusal Plazmid Hazırlığı | Plazmit lineerleştirme ve temizleme | Plazmid doğrusallaştırma | 1 |
DNA Doğrusallaştırma ve Temizleme | |||
Plazmid DNA kalite kontrolü | Konsantrasyon saflık | Ultraviyole (UV) Spektrofotometri | 1-2 |
Plazmid konformasyonu | Agaroz Jeli Elektroforezi (AGE) | ||
Kapiler Elektroforesi (CE)-İsteğe Bağlı | |||
Plazmid Tanımlama | Kısıtlama enzimi tanımlama / AGE |
Doğrusallaştırma yöntemlerinin esnek seçimi
Yüksek kurtarma oranına ulaşmak için DNA çıkarma ve temizleme yöntemlerinin optimizasyonu.
Süperheliksid konformasyon oranı %80'den fazla olan plazmid örnekleri için araştırmacı düzeyinde kesin süreç kontrol standartları.
Deney gereksinimlerini karşılamak için yüksek standartlı ve verimli plazmid hazırlama ve kalite kontrol hizmetleri.
Yaohai Bio-Pharma katalogundaki mRNA_luciferase ürününü örnek alarak, transkripsiyon şablonu olarak kullanılan plazmid örneği (araştırma seviyesi) %90'dan fazla süperhelikoidal oranına sahip, lineerleşme oranı ise neredeyse %100'e ulaşmakta ve ardından yapılan transkripsiyon oranı 1:200'ye kadar çıkabilmektedir (lineerleşmiş plazmid DNA:mRNA).
Lineerleştirilmiş bir plazmid şablonuyla hazırlanmış mRNA_luciferase, 293T hücrelerine transfekte edilir ve transfeksiyon sonrası 24 saatte enzim-altı reaksiyon aktivitesi değerlendirilir.
Açık bir şekilde güçlü luciferaz aktivitesi sinyali tespit edilebilir, yani luciferaz proteini etkin şekilde ifade edilmektedir, bu da transkripsiyon şablonunun safliğinin yüksek kaliteli mRNA hazırlamaya tamamen uygun olduğunu göstermektedir.
Süperhelikoidal Plazmid Oranı Analizi
Luciferaz mRNA Ifşası İçi Doğrulaması