5'-uc kaplama, mRNA'nın temel bir değiştirilmesidir. Cap yapılarına sahip mRNA'lar, özellikle Cap1 yapıları, mRNA'lara vivo koşullarında doğaüstü bağışıklık tepkilerini engellemelerine yardımcı olur ve bu da verimli protein çevirisine sonuçlanır.
Enzimatik kaplama (iki adımlı yöntem), eukaryot organizmalarında olan kaplama sürecine benzer geleneksel mRNA kaplama yöntemidir. Bir dizi enzimin etkisiyle, 7-metilguanin (m7G), mRNA'nın 5'- ucuna 5'-5' trifosfat bağıyla bağlanır ve metilasyon değiştirilmesi geçirerek Cap 1 (m7GpppN) kap yapısını oluşturur.
Doğal kap yapısı oluşumu şeması
Enzimatik kaplama reaksiyon akışı şu şekildedir:
Lineerleşmiş plazmid DNA, T7 polimeraz varlığında in vitro transkripsiyon (IVT) için bir şablon olarak kullanılır ve mRNA, vaktsiya kaplama enzimi ve 2'-O-metiltransferaz kullanılarak tek adımlı bir temizlemeden sonra 5' uç-kap yapıyla oluşturulur.
Hizmetler Detayları
İsteğe Bağlı Hizmet |
Hizmet Ayrıntıları |
Teslimat Süresi (Gün) |
mRNA Enzimatik Kaplama |
Enzimatik kapanma reaksiyonu |
1 |
Kapanma reaksiyonu iyileştirmesi - isteğe bağlı |
Reaksiyon bileşeni tasarımı ve optimizasyonu |
3~7 |
Özelliklerimiz
- Kapanma reaksiyonu bileşeninin tasarlanması ve iyileştirilmesi
Kapanma reaksiyonu bileşeni iyileştirilmiştir ve mRNA transkriptinin üretimi büyük ölçüde artırılmıştır.
- Dışarıda ifade doğrulaması
Kapalı mRNA, 293T hücrelerine transfeksiyon edilir ve hedef proteinin ifadesi tespit edilebilir.
- RNase Üzerinde Strik Kontrol
Deney ortamı ve tüketime malzemelerindeki RNase'ler üzerinde sıkı kontrol sayesinde, mRNA'nın bozunması etkili bir şekilde önlenmiştir.
Durum İncelemesi
Yaohai Bio-Pharma'nın mRNA platformu, mükemmel bir kapanma reaksiyonu süreci kurmuştur.
EGFP mRNA için, enzymatik kaplama ile hazırlanan bir mRNA ön-produkti, 293T hücrelerini 24 saat boyunca transfeksiyonundan sonra yüksek seviyede bir eGFP fluoresans sinyali (yeşil fluoresans) gözlemlenebilir ki, bu Western Blot (WB) ile tespit edilir ve hedef protein olan artırılmış yeşil floresan protein (eGFP)'nin in vitro etkili bir şekilde ifade edilebileceğini gösterir.
Enzymatik Kaplanmış eGFP mRNA'nın 293T Hücredeki İfade
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
