mRNA'nın kütle üretimine ilişkin olarak, in vitro transkripsiyon (IVT) daha verimli ve olgun bir yöntemdir. IVT reaksiyonu, T7 promotorunu içeren doğrusallaştırılmış plazmid DNA'yı şablon olarak kullanır ve mRNA, T7 RNA polimeraz varlığındaki nükleotid trifosfatlar (NTP'ler) ile sentezlenir.
Nükleotid değiştirme, mRNA'nın keşifinde bir kırılma noktasıdır; değiştirilmemiş mRNA molekülleri, doğabilimsel bağışıklığı etkinleştirmek için hücre içi RNA sensörleri tarafından tanınır. mRNA'nın vivo bağışıklık potansiyeli ve çeviri verimliliği konusunda dikkate alındığında, IVT süreci genellikle belirli türde değiştirilmiş NTP'ler kullanılır ve yaygın değiştirilmiş nükleotitler pseudouridine (Ψ), N1-metil-pseudouridine (N1Ψ) ve 5-metil-sitozin (5mC)'dır.
mRNA'nın In Vitro Transkripsiyon Süreci
In vitro transkripsiyon (IVT) reaksiyon diyagramı
Hizmetler Detayları
İsteğe Bağlı Hizmet |
Hizmet Ayrıntıları |
Teslimat Süresi (iş günü) |
in vitro transkripsiyon (IVT) |
IVT, In vitro transkripsiyon |
1 |
| Nükleotid değişiklikleri (Ψ/N1Ψ/5mC, vb.) |
| DNA şablonu kaldırılması (DNase I) |
IVT koşullarının optimizasyonu - isteğe bağlı |
IVT reaksiyon bileşenlerinin tasarlanması ve optimizasyonu |
2-5 |
Özelliklerimiz
- Çeşitli Nükleotid Modifikasyon Stratejileri
mRNA'nın in vivo stabilitesini ve proteин ifadesini geliştirin.
- Sıkı Test Tasarımı ve Optimizasyonu
10kb'ye kadar mRNA parçası hazırlama yapılabilir.
IVT reaksiyon koşullarını optimize ederek transkripsiyon oranı 1:200'ye kadar artırılır.
- RNase Üzerinde Strik Kontrol
Deneysel ortam ve tüketime yatkın malzemeler aracılığıyla RNase üzerindeki strik kontrol, mRNA degradasyonunu etkili bir şekilde önleyebilir.
Durum İncelemesi
Mevcut IVT reaksiyon sistemi yaklaşık olarak 100 nt uzunluğundaki sentetik sistemler için optimize edilmiştir, ancak keyfi uzunluktaki mRNAlar için değildir. mRNA dizisi ne kadar uzunsa, transkripti o kadar zorlaşır ve degradasyona daha fazla yatkın hale gelir.
Yaohai Bio-Pharma, yaklaşık 10 kb uzunluğunda özelleştirilmiş mRNA dizileri hazırlamak amacıyla, deneysel tasarımın sıkı uygulanması, reaksiyon koşullarının sürekli optimizasyonu ve RNase'nin strik kontrollü ile, 1 μg doğrusallaştırılmış plazmidin in vitro transkripsiyonundan sonra yüksek kaliteli örnekleri başarıyla hazırlamıştır ve 1:135 oranında yüksek transkripsiyon oranına ulaşmıştır. Daha sonra başlangıçta temizlenen 135 μg mRNA ürünleri elde edilmiştir.
mRNA Kimlik (Agaroz Jeli Elektroforezi)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
