RNA öncüllerinin toplu üretiminde kullanılan yaygın bir yöntem in vitro transkripsiyondur (IVT). IVT reaksiyonu, T7 promotorunu içeren doğrusallaştırılmış plazmid DNA'yı şablon olarak kullanır ve nükleozit trifosfatlar (NTP'ler) varlığında T7 RNA polimeraz ile birlikte bir RNA öncülle sentez yapar.
In vitro siklizasyon yöntemleri arasında kimyasal ligasyon, enzymatik ligasyon ve permütasyonlu intron-ekson (PIE) yöntemi bulunur. Kimyasal ligasyon ve enzymatik ligasyon, daha kısa RNAların siklizasyonu için uygunlardır. Parçanın 100 nt'den büyük olduğunda siklizasyon oranı büyük ölçüde azalır. Karşılaştırıldığında, PIE sistemi temelindeki nükleaz yöntemi, 8 kb dizilerin siklizasyonunu gerçekleştirebilir.
Guanosin trifosfat (GTP) katalizi altında, PIE yapısı ekstrantron dizilerinin siklizasyonuna uğrar. Siklizasyon oranını artırmak için mantıklı bir stratejiyle Yaohai Bio-Pharma, maksimum 4 kb'lık dizilerin siklizasyonunu sağlayabilir ve siklizasyon verimliliği %80'den fazla olabilir.
RNA'nın in vitro siklizasyon reaksiyonu şu şekilde akar:
RNA öncüsü, in vitro transkripsiyon ile sentezlenir ve GTP katalizi altında PIE bileşeni circRNA oluşturmak için kendini splicing işlemine tabi tutar.
Hizmetler Detayları
| Süreç |
Hizmet Ayrıntıları |
Teslimat Süresi (iş günü) |
| Dışarıda Transkripsiyon ve Daireselleştirme |
Reaksiyon sistemi onaylama |
1-2 |
| In Vitro Transkripsiyon ve Siklasyon Reaksiyonları |
| RNase R İndirgeme |
| Reaksiyon optimizasyonu |
Reaksiyon Bileşimi, Zaman Optimizasyonu |
2-5 |
Özelliklerimiz
- Sıkı Test Tasarımı ve Optimizasyonu
RNA siklizasyonu için maksimum 4 kb'ye kadar ulaşılabilir.
- Yüksek siklizasyon verimliliği
Rasyonel bir dizi optimizasyon stratejisiyle %80'den fazla bir siklizasyon oranı elde edilebilir.
- RNase Üzerinde Strik Kontrol
Deney ortamında ve tüketime uygun malzemelerdeki RNase'lerin sıkı denetimiyle, RNA bozunması etkili bir şekilde önlenir.
Durum İncelemesi
CircRNA'nın in vitro siklizasyonu ve zenginleştirme
PIE sistemi temel alınarak, Yaohai Bio-Pharma circRNA dizisini optimizasyonuna tabi tutmuştur. Agaroz jel elektroforesi (AGE) ile %80'den fazla bir siklizasyon oranına ulaşılmıştır. RNase R kullanılarak circRNA zenginleştirilmiştir. E-gel elektroforesi sonuçları göstermektedir ki lineer RNA öncülleri sindirilmiştir ve daha fazla temizlemeden sonra çoğul circRNA'nın kaldırılması sağlanmıştır. Temizleme çözümü Yaohai Bio-Pharma tarafından kendi aralarında geliştirilmiştir.
CircRNA'nın in vitro siklizasyonu ve zenginleştirme
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
