Hücre Tabanlı Etkinlik Assayları
MRNA Etkinlik Analizinin Önemi
MRNA aşılarının ve tedavilerinin hızlı gelişimiyle birlikte, biyolojik aktivitelerini (mRNA'nın çeviri verimliliği ile ilgili) tanımlamak için özel analiz yöntemleri gerekir. Bu yöntemler genellikle hedef proteinin fonksiyonel analizlerine ve hücre transfeksiyonuna dayanır.
Yaohai Bio-Pharma, mRNA ilaç maddeleri veya LNP ürünleri için hücre tabanlı etkinlik analizleri sunar, bunlar arasında 293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 hücreleri gibi hücre transfeksiyonu ve ELISA veya Batı Lehimlemesi (WB) analizleri bulunur.
Etkinlik Analizleri İçin Düzenleyici Gereksinimler
WHO düzenleyici konularına göre, “Her son aşı partisinin etkinliği, uygun bir niceliksel ve doğrulanmış işlevsel yöntem(ler) kullanılarak belirlenmelidir. Potansiyel in vitro etkinlik analizleri, hücre tabanlı transfeksiyon sistemleri veya hücre dışı analizler içerebilir.” Ayrıca USP, mRNA'nın potansiyelini test etmek için bir “hücre tabanlı analiz” önermiştir, yani hedef proteinin ifadesi.
Analitik Yöntem
|
Analiz
|
Yöntemler
|
|
Etkinlik Analizleri
|
Hücre tabanlı transfeksiyon ve hedef protein kimliği:
293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 hücreleri, vb.
|
İşlem
Adım 1. Hücre Tabanlı mRNA veya mRNA-LNP ile Transfeksiyon
Hücreler kültür edilir ve mRNA veya mRNA-LNP ile transfeksiyon yapılır. Detay olarak, mRNA, bir transfeksiyon jadesiyle karıştırıldıktan sonra hücrelere aktarılırken, mRNA-LNP doğrudan hücrelere transfeksiyon edilir. 24-48 saat sonra, ifade edilen protein içeren üst katman sentrifüjle netleştirilir.
Adım 2. Hedef Proteinin İşlevsel Analizleri
Hedef proteinlerin işlevsel bağlayıcılığını değerlendirmek için ELISA veya WB analizleri gerçekleştirin.
Durum İncelemesi
HRNA Örnekleri için Hücre Tabanlı Etkinlik Analizleri
Yaohai-BioPharma, hRNA için hücre tabanlı etkinlik analizi yöntemini geliştirdi, bu da hücre kültürü, hücre transfeksiyonu ve protein işlevsel analizleri içerir. eGFP mRNA'sını, mCherry mRNA'sını, lüsyferaz mRNA'sını ve spike protein mRNA'sını 293T hücrelerine transfeksiyon ettik ve hedef proteinleri fluoresans, ışık yada renk sinyali, WB, ELISA aracılığıyla tespit ettik.
Yaohai Bio-Pharma tarafından hRNA Ürünleri için Hücre Tabanlı Etkinlik Analizleri
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
